[发明专利]一种检测土壤硝酸还原酶活性的分析方法

摘要

本发明涉及一种检测土壤中硝酸还原酶活性的分析方法：1)称取过筛的土壤风干样品n份于试管中，向试管中分别加入2，4－二硝基酚溶液，混匀；然后向其中n－1支试管中加入底物硝酸钾溶液，另1支试管中加入等量的蒸馏水作为样本对照；再向试管中分别加入葡萄糖溶液，用蒸馏水补充至5－10ml，恒温培养；2)用蒸馏水补充至50－100ml；3)加入铝钾矾饱和溶液，振荡，过滤；4)取滤液加蒸馏水、显色剂，在520nm下测定吸光值A；5)计算样品中亚硝酸根含量。本发明优点为：1)简化了操作步骤，减少了厌养培养过程的复杂性和不确定性；2)减少对设备要求的依赖性；3)准确度高，易操作；4)结果稳定可靠，重现性好。

主权项

1. 一种检测土壤中硝酸还原酶活性的分析方法，其特征在于：1)称取0.5-1g过0.5-1.5mm筛的土壤风干样品n份分别装入n支试管中，n≥2，向试管中分别加入1-3mL 0.5-1mM/L的2，4-二硝基酚溶液，混匀；然后向其中n-1支试管中加入1-1.5mL重量浓度0.05-0.15％的底物KNO3溶液，另1支试管中加入等量的蒸馏水作为样本对照；再向试管中分别加入1-2mL重量浓度0.5％-1％的葡萄糖溶液作为氢的供体，再用蒸馏水补充至5-10mL，摇匀，塞上不透气的橡胶塞后29-31℃恒温培养24h；同时作试剂空白对照；2)培养结束后，用10-40mL蒸馏水将试管内的土液混合物完全转移至100mL的三角瓶中，再用蒸馏水补充至50-100mL；3)加入铝钾矾饱和溶液1-2mL，振荡，过滤；4)取滤液1mL于50mL容量瓶中，加入1-3mL蒸馏水和4-8mL显色剂(相对于亚硝酸根离子过量)，然后用蒸馏水定容至刻度。15分钟后，在520nm下用分光光度计比色测定吸光值A；5)在520nm下比色测定一系列已知浓度的亚硝酸根标准溶液的吸收值A’，以亚硝酸根的浓度和测定的吸光值A’制作工作标准曲线，得到斜率b；6)根据吸光值A和斜率b，计算所测定溶液中亚硝酸根的浓度S，S＝A*b；7)计算样品中亚硝酸根含量；8)计算硝酸还原酶活性：计算公式为：[(S1-S2)*50*V1/1000*V2]/W.T＝mgNO2-N/g土.24h式中：S1为样品中的NO2-N的含量(mg/L)；S2为样品对照中的NO2-N的含量(mg/L)；50为定容的溶液体积(mL)；V1为提取液总体积(mL)；V2为吸取滤液的体积(mL)；W为称土样重(g)；T为培养土样的时间(h)；1000为单位转化系数。