[发明专利]一种从林蛙组织中萃取胶原螺旋肽的制备方法

摘要

一种从林蛙组织中萃取胶原螺旋肽的制备方法，用干制与鲜活秋季捕捉野生或人工养殖雄性林蛙或被剥取林蛙油的雌性林蛙体作原料，经预处理、复合酶解、生物酶修饰、离心分离、稀释、超微膜纯化、低温浓缩、离心喷雾干燥、胶囊包装成林蛙胶原螺旋肽成品。本发明的优点为：采用生物技术将林蛙体具有螺旋状两亲性结构与细胞膜和肌肤有高亲和性的林蛙生物防护素——胶原螺旋肽通过生物酶解、修饰、分离纯化、浓缩成林蛙胶原螺旋肽生物保健品，为林蛙的药用价值、食用价值，提供了新的途径。

主权项

1. 一种从林蛙组织中萃取胶原螺旋肽的制备方法，其特征在于：1)林蛙体的获取：1.1林蛙体的选择：在秋季捕捉林蛙，经干制法被剥取林蛙油后的雌性林蛙和雄性林蛙体，或经鲜活制法剥取蛙油后的新鲜雌性蛙体，或鲜活的雄性林蛙体为原料；1.2林蛙体的贮存：A、收集干制的雄蛙干或取油后的雌蛙干，贮于0-4℃冷藏库内；B、收集鲜活雄蛙或被剥取蛙油的雌蛙，速冻后贮存于-18℃的冷冻库内备用；2)林蛙体的预处理：2.1取干制的林蛙体，用中药切片机切成1.0-5.0mm的蛙体片，然后将蛙体片置于不锈钢槽内，加入1-5倍蛙体重量的蒸馏水或纯净水，同时加入1-3％蛙体重量的柠檬酸钠、酒石酸或VC，浸泡4-10小时，水温控制在20-40℃之内，每隔20-60min搅拌一次；2.2取冷冻贮存的蛙体，采用电动刨肉机，将蛙体均匀的刨成1.0-5.0mm的薄片，然后置于不锈钢槽内，加入1-3倍蛙体重量的蒸馏水或纯净水，同时加入1-3％蛙体重量的柠檬酸钠、酒石酸或VC，浸泡2-6小时，每隔20-60min搅拌一次，水温控制在10-20℃；3)生物酶解：3.1复合酶解：将预处理后的林蛙片连同浸泡汁，加入真空反应釜内，加热至35-60℃，调整PH值为6-8，每千克林蛙体加入2-6g的1398中性蛋白酶，1-3g的1203脂肪酶，1-5g防腐剂乳酸菌素或氟硅酸钠，每100万单位酶活量加入2-8g亚硫酸钠或VC作为酶激活剂；真空度控制在100-800Pa，搅拌下酶解反应6-12h；然后用100-300目的双联过滤器过滤，得复合酶解液；3.2生物酶修饰：经酶降解液体含有蛋白酶与肽酶复合体，味比较苦，为修饰苦味和彻底酶解，将复合酶解液用空气压力输送至生物酶修饰反应釜中，调整PH值为6-8，温度控制在40-60℃，加入蛙体质量0.2-2.0％的丹麦诺维信功能食品工业生产的Flavourzyme复合风味蛋白酶、0.1-1.0％的磷脂酯酰基水解酶，真空度为200-800Pa搅拌酶修饰3-8h；得胶原螺旋肽分子液；3.3灭酶，采用超高温瞬间灭酶法在120-150℃/s，出料温度为30-50℃的条件下灭酶，或加温60-80℃/30-60min使酶失活；4)胶原螺旋肽分离纯化4.1离心分离：采用高速离心机将酶解液以6000-60000r/min的速度离心6-20min，将上层液和中层液合并输入稀释罐体内，即酶解分离液，下层液被分离出去；4.2稀释：将酶解分离液，按1∶1-3重量比例加入纯净水或蒸馏水，在真空度100-800Pa搅拌稀释；4.3超微膜纯化：将稀释液用循环泵加压0.2MPa-0.8MPa通过平衡保险分离器在0.1um-0.5um的精度下进行分离，然后用5-50m3/h的循环泵将滤液在0.6-1.6MPa的压力下通过50000道尔顿的超微膜纯化，获得分子量大于等于50000道尔顿的胶原螺旋肽液；4.4低温浓缩：采用热隔膜低温浓缩技术对胶原螺旋肽液进行浓缩，温度为40-60℃，真空度为0.3-1.8MPa，除去胶原螺旋肽液中30-70％体积的水分，然后将浓缩液输送到平衡罐内；5)干燥成型：5.1喷雾干燥：将浓缩液用浓浆泵以100-500r/min的流速输入180-260℃的离心喷雾干燥塔内干燥成粉沫；在出料口收集胶原螺旋肽粉，用复合袋密封，获得分子量大于等于50000道尔顿的胶原螺旋肽粉。