[发明专利]一种检测土壤反硝化酶活性的分析方法

摘要

本发明涉及一种检测土壤中反硝化酶活性的分析方法：1)称取过筛的土壤风干样品n份于试管中，向其中n－1支试管中加入底物硝酸钾溶液，另1支试管中加入等量的蒸馏水作为样本对照；然后向试管中分别加入葡萄糖溶液，用蒸馏水补充至15－20mL，摇匀，加塞后恒温培养；2)4000r/min离心20min；3)用紫外分光光度法测定吸光度A₂₂₀，A₂₇₅；4)用校正吸光度A＝A₂₂₀－A₂₇₅计算查得硝酸根含量。本发明优点为：1)简化了操作步骤，减少了厌养培养过程的复杂性和不确定性；2)减少对设备要求的依赖性；3)方法准确度高，易操作；4)结果稳定可靠，重现性好；5)省略了样品的显色过程。

主权项

1. 一种检测土壤中反硝化酶活性的分析方法，其特征在于：1)称取0.5-1g过1-1.5mm筛的土壤风干样品n份分别装入n支试管中，n≥2，向其中n-1支试管中加入5-15mL 5g/L-15g/L的底物KNO3溶液，另1支试管中加入等量的蒸馏水作为样本对照；然后向试管中分别加入1-2mL重量浓度0.5％-1％的葡萄糖溶液作为氢的供体，用蒸馏水补充至15-20mL，摇匀，塞上不透气的橡胶塞后37℃恒温培养48h；同时作试剂空白对照；2)培养结束后，3900-4100r/min离心20-25min；3)用紫外分光光度法分别测定吸光度A220，A275；4)求出校正吸光度A＝A220-A275；5)制作工作标准曲线，以硝酸根溶液的系列浓度和测定的吸光值A’制作工作标准曲线，得到斜率b；6)根据吸光值A和斜率b，计算所测定溶液中硝酸根的浓度S，S＝A*b；7)计算样品中硝酸根浓度；8)计算反硝化酶活性：计算公式为：[S1-(S2-S3)*V/1000]/W.T＝mgNO3 --N/g土·48h式中：S1为试剂空白中的NO3 --N的含量(mg)，S2为样品中的NO3 --N的含量(mg/L)，S3为样品对照中的NO3 --N的含量(mg/L)，V为浸提液总体积(mL)，W为称土样重(g)，1000为单位转换系数，T土样培养时间(h)。