[发明专利]可溶性CD40L刺激人外周血B细胞长期培养方法有效
| 申请号： | 200710020522.8 | 申请日： | 2007-03-06 |
| 公开（公告）号： | CN101041815A | 公开（公告）日： | 2007-09-26 |
| 发明（设计）人： | 吴超;黄祖瑚;刘勇;陈广梅;陈军浩 | 申请（专利权）人： | 南京大学医学院附属鼓楼医院 |
| 主分类号： | C12N5/08 | 分类号： | C12N5/08 |
| 代理公司： | 南京中新达专利代理有限公司 | 代理人： | 孙鸥 |
| 地址： | 210008*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种利用可溶性CD40配体(sCD40L)刺激人外周血B细胞的长期培养方法。本发明无菌收集人外周血，淋巴细胞分离液分离人外周血，将人外周血单个核细胞置于由含10％人AB血清、转铁蛋白、胰岛素组成的培养液中重悬细胞，放入孵育箱内培养，加入2ug/ml的sCD40L、CsA 625ug/ml、2ng/ml的IL－4继续刺激培养。解决了现有方法存在的引入外源性的细胞，增加实验的干扰因素，无法供应临床的缺陷。本发明采用CD40配体体外刺激人外周血B细胞可产生B细胞大量持续培养，能从20ml外周血单个核细胞中持续大量培养B细胞。培养活化后的B细胞可以高表达MHC I、MHC II、CD80、CD86等抗原递呈的必需分子，有效提呈肿瘤细胞裂解物、抗原肽、抗原cDNA，甚至RNA，诱发特异性细胞免疫反应。 | ||
| 搜索关键词： | 可溶性 cd40l 刺激 人外周血 细胞 长期 培养 方法 | ||
【主权项】：
1.可溶性CD40L刺激人外周血B细胞长期培养方法，其步骤为：(1)无菌收集人外周血；(2)淋巴细胞分离液分离人外周血，得人外周血单个核细胞；(3)将人外周血单个核细胞置于由含10％人AB血清、转铁蛋白、胰岛素组成的培养液中重悬细胞；(4)放入5％CO2、37℃、饱和湿度的孵育箱内培养；(5)加入2ug/ml的sCD40L、CsA 625ug/ml、2ng/ml的IL-4继续刺激培养。
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