[发明专利]一种用CD25/IL－2Ra抗体标记人肝组织毛细胆管的方法

摘要

一种用CD₂₅/IL－2Ra抗体标记人肝组织毛细胆管的方法，属于组织细胞染色表达技术领域。本发明以人肝穿刺活检组织为标本，标本经抗原修复处理，以CD₂₅/IL－2Ra为一抗，经免疫组化或免疫荧光进行显色摄片，再以阻断试验确定其特异性，确认标记人肝组织毛细胆管。用二种不同克隆号的CD₂₅/IL－2Ra作一抗，免疫组化肝毛细胆管呈棕黄色条索状结构，表达效果均优良；或通过免疫荧光肝毛细胆管呈绿色荧光；阻断试验确定肝毛细胆管表达CD₂₅/IL－2Ra特异性。我们设立阳性对照(扁桃体)和CD₄、CD₈之间的片间对照，结果显示免疫组化显色清晰，定位正确；同一组织分别用CD₂₅/IL－2Ra和CEA作对照，证明CD₂₅/IL－2Ra比CEA更有特异性，显色效果优于CEA，更利于肝毛细胆管分布、形态观察。

主权项

1、一种用CD25/IL-2Ra抗体标记人肝组织毛细胆管的方法，其特征是以人肝穿刺活检组织为标木，标本经抗原修复处理，以CD25/IL-2Ra为一抗，经免疫组化或兔疫荧光进行显色摄片，再以阻断试验确定其特异性，确认CD25/IL-2Ra标记人肝组织毛细胆管，步骤为：(1)标本抗原修复处理：以人肝穿刺活检组织为标本，标本用10％中性福尔马林液固定，石蜡包埋，4μm薄切片，脱蜡至水，柠檬酸高压锅抗原修复，贴于玻片上用于免疫处理；(2)免疫组化或免疫荧光：免疫组化：抗原修复处理后的标本用0.3％过氧化氢祛除内源性过氧化物酶，保持10min，PBS冲洗保持3min，冲洗3次，甩干；滴CD25/IL-2Ra一抗，室温孵育1h，PBS冲洗保持3min，冲洗3次，甩干；滴广谱二抗ElivisionA液保持20min，PBS冲洗保持3min，冲洗3次，甩干；滴广谱二抗Elivision B液保持30min，PBS冲洗保持3min，冲洗3次，甩干；用DAB显色剂于普通显微镜下控制显色；或免疫荧光：抗原修复处理后的标本，PBS冲洗保持3min，冲洗3次，甩干；滴CD25/IL-2Ra一抗，室温孵育1h，PBS冲洗保持3min，冲洗3次，甩干；滴FITC荧光素标记山羊抗小鼠IgG，暗处孵育30min，荧光显微镜观察并摄片；(3)阻断试验：抗原修复处理后的标本，先滴不带FITC荧光素的CD25/IL-2Ra一抗使之与标本组织CD25/IL-2Ra抗原表位结合，洗涤后再滴CD25/IL-2Ra-FITC，由于先前标本组织CD25/IL-2Ra抗原表位已与不带FITC荧光素的CD25/IL-2Ra一抗结合，使CD25/IL-2Ra-FITC无法结合，荧光显微镜下显示阴性结果。