[发明专利]共表达GDNF和BDNF的转基因神经干细胞

摘要

本发明描叙了一种构建共表达GDNF和BDNF的转基因神经干细胞的方法及其用途和意义，其主要特征为：1)表达的GDNF和BDNF亲本为人源的、为编码成熟GDNF和BDNF蛋白的核苷酸序列；2)GDNF和BDNF的N－未端连结人IL－2分泌先导序列，表达的重组GDNF和BDNF为分泌型蛋白；3)构建的表达质粒含有由CMV启动子驱动，通过内部核糖体结合位点(IRES)连结GDNF和BDNF的表达盒；4)神经干细胞为人源的，应用电击转导法，使其为共表达GDNF和BDNF的转基因神经干细胞；本发明的转基因神经干细胞，弥补了神经干细胞自身GDNF和/或BDNF的不足，为临床冶疗神经退行性疾病－帕金森氏病和/或其他中枢神经系统疾病提供了一种转基因神经干细胞治疗新途经。

主权项

1、一种共表达神经营养因子GDNF和BDNF的表达质粒：本发明构建的表达质粒以pIRESneo3载体为骨架，经改造形成本发明的共表达神经营养因子GDNF和BDNF的表达质粒，其表达盒具有以下主要特征：a).神经营养因子GDNF和BDNF基因均为编码GDNF和BDNF成熟蛋白氨基酸序列的核苷酸序列；b).神经营养因子GDNF和BDNF基因的N-末端均连结着人白细胞介素-2的分泌先导序列，此分泌先导序列由编码20个氨基酸(MYRMQLLSCIALSLALVTNS)的60个核苷酸组成；c).神经营养因子GDNF和BDNF基因是通过内部核糖体结合位点(IRES)连接的；GDNF基因位于内部核糖体结合位点上游、而BDNF位于内部核糖体结合位点的下游、SV40多聚腺嘌呤的上游；d).CMV启动子驱动神经营养因子GDNF和BDNF基因的共表达。