[发明专利]一种利用亲和层析法分离纯化纤溶酶的方法

摘要

本发明公开了一种利用亲和层析分离纯化纤溶酶的方法。该方法包括亲和层析介质的制备和亲和层析两个步骤。其中亲和层析介质的制备包括将人血纤维蛋白原溶于无菌水中，35～40℃保温至溶解；将琼脂糖溶于巴比妥纳－HCl缓冲液中，灭菌后冷却；加入人凝血酶，保温，滴入预冷至2～10℃的四氯乙烯中，制成球形颗粒；用无离子水清洗，于35～40℃保温1～2h；加入戊二醛作为交联剂进行交联；亲和层析是在温度为2－10℃的条件下，用缓冲液平衡层析柱，再加入样品液；然后缓冲液冲洗；最后用洗脱液洗脱。该只需通过一次亲和层析便可分离得到所需要的纤溶酶，亲和层析介质可以反复使用，提高了酶的回收率和纯度，节约了时间和人力。

主权项

1、一种利用亲和层析分离纯化纤溶酶的方法，其特征在于包括如下步骤和工艺条件：(1)亲和层析介质的制备，包括如下步骤：a.将人血纤维蛋白原以50～100mg/mL浓度溶于无菌水中，35～40℃保温直至完全溶解；b.将琼脂糖溶于pH7.6～8.2的巴比妥纳-HCl缓冲液中，配制成质量浓度为1.2～1.8％的溶液，灭菌后冷却至48～52℃；c.将步骤b配置的溶液与步骤a已经溶解的纤维蛋白原溶液混合，加入4～10IU/mL的人凝血酶，混合均匀，保温20～40分钟；d.将步骤c的混合液用注射器滴入预冷至2～10℃的四氯乙烯中，制成球形颗粒；e.取出球形颗粒，用无离子水清洗，于35～40℃保温1～2h；f.加入质量浓度为3～5％的戊二醛作为交联剂进行交联固定，用无离子水清洗后于2～10℃保存备用；(2)亲和层析：将步骤(1)f制备好的亲和层析介质装进层析柱；在温度为2-10℃的条件下，用pH7.6～8.0的缓冲液平衡层析柱，再加入样品液；然后用pH7.6～8.0的缓冲液冲洗，去除杂质；最后用pH5.2～5.8的洗脱液洗脱，收集洗脱液。