[发明专利]辅酶复合物的制备方法

摘要

本发明涉及一种辅酶复合物的制备方法。本发明方法采用温差破壁、减压浓缩等成熟工艺，经超滤分离、柱层析纯化、浓缩、沉淀析出等步骤得到辅酶复合物。本方明方法在取得令人满意的产品得率的同时，降低了对生产设备的要求。其次，充分利用了现有设备，将超滤步骤提前，一方面代替活性炭的分离提取，减少了工艺环节，同时避免了洗脱时碱性环境对辅酶活性的破坏。另一方面，由于超滤可以将大部分分子量大、粘度高的杂质除去，再进入层析柱，降低了分离难度，提高了层析分离纯化的效率以及层析的生产速度。第三，在本发明工艺中各提取纯化步骤之间无须各种附加处理，可以直接进入下一步操作，因此，可以使整个工艺做到无缝式，连续化，自动化操作，提高了整个过程的整体性，降低了生产周期，简化了操作步骤。所得产品色泽呈淡黄色、疏松，符合国家相关标准WS₁－XG－010－2002。

主权项

1.一种辅酶复合物的制备方法，其特征是该方法的步骤如下：a.原材料的处理：将酵母、水和冰混合物按1∶1∶2～4的质量比混合后，置于沸水中，然后在80℃～100℃温度下保温5～10min，迅速投入碎冰冷却，经离心机离心分离，取上清液，离心条件为：4000rpm～6000rpm，时间为：15～30min；b.超滤分离：将步骤a所得上清液置于超滤器，在0.1～0.3MPa超滤压下进行分离纯化，取滤出液；所述超滤器采用切割分子量8000～12000的超滤膜；c.柱层析纯化：将步骤b所得的滤出液用强碱型阴离子交换树脂进行吸附，洗脱体系为0.2mol/L的NaCl溶液，并用0.1mol/L HCl调节pH到1.5～2.0，洗脱流速为150～250mL/h，并用核酸蛋白检测仪实时监测流出液OD值，收集在254nm波长下有光吸收的部分；d.浓缩：将步骤c所得洗脱液置于旋转蒸发仪中，在55℃～60℃温度下减压浓缩至原体积的1/15～1/20；e.沉淀析出：将步骤d所得浓缩液的pH值调至2～3，缓慢倒入10～20倍体积，-10℃～-20℃的丙酮溶液中，该丙酮溶液用5～8mol/L硝酸调节pH到2～3，静置过夜，取沉淀，即得辅酶复合物。