[发明专利]测量三通道荧光共振能量转移显微镜G参数的方法

摘要

一种三通道荧光共振能量转移显微镜G参数的测量方法，该方法的步骤如下：①测量三通道荧光共振能量转移显微镜漏过系数；②用三通道荧光共振能量转移显微镜测量CFP－YFP融合蛋白在CFP，YFP和FRET通道内的平均荧光强度；③计算三通道荧光共振能量转移显微镜G参数。本发明在活细胞内测量了三通道FRET显微镜G参数，并且测量结果的标准误很小，表明测量的精度很好。

主权项

1、一种三通道荧光共振能量转移显微镜G参数的测量方法，其特征在于该方法的步骤如下：①测量三通道荧光共振能量转移显微镜漏过系数：在中国仓鼠卵巢癌细胞内分别表达青色荧光蛋白CFP和黄色荧光蛋白YFP，利用三通道荧光共振能量转移显微镜分别测量表达YFP荧光蛋白的CHO细胞在FRET通道和YFP通道内的平均荧光强度，分别测量表达CFP荧光蛋白的CHO细胞在FRET通道和CFP通道内的平均荧光强度，利用下列公式计算计算漏过系数a，b：a＝IFRET(Y)/IYFP(Y) b＝IFRET(C)/ICFP(C) 式中：IFRET(Y)表示YFP蛋白在FRET通道内的平均荧光强度，IYFP(Y)表示YFP蛋白在YFP通道内的平均荧光强度，IFRET(C)表示CFP蛋白在FRET通道内的平均荧光强度，ICFP(C)表示CFP蛋白在CFP通道内的平均荧光强度。②用三通道荧光共振能量转移显微镜测量CFP-YFP融合蛋白在CFP，YFP和FRET通道内的平均荧光强度，三通道荧光共振能量转移显微镜G参数：在CHO细胞内表达CFP-YFP融合蛋白，表达CFP-YFP融合蛋白的CHO细胞用三通道FRET显微镜分别记录CFP，YFP和FRET通道内的平均荧光强度为CFP，YFP和FRET；③计算三通道荧光共振能量转移显微镜G参数：计算FC＝FRET-(a×YFP)-(b×CFP) FR＝[FRET-(b×CFP)]/(a×YFP) G＝[1-(FR-1)×0.094]×FC/[(FR-1)×0.094×CFP]式中0.094是本发明使用的系统在440nm激发时YFP荧光团与CFP荧光团的吸收系数之比。