[发明专利]一种从土豆中快速提纯酪氨酸酶的方法无效
| 申请号： | 200710041289.1 | 申请日： | 2007-05-25 |
| 公开（公告）号： | CN101434939A | 公开（公告）日： | 2009-05-20 |
| 发明（设计）人： | 朱利民;柴艳倩;董唯静;李树白;张玉高;周立明 | 申请（专利权）人： | 东华大学;广东溢达纺织有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/04 | 分类号： | C12N9/04 |
| 代理公司： | 上海泰能知识产权代理事务所 | 代理人： | 黄志达;谢文凯 |
| 地址： | 201620上海市松*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种从土豆中快速提纯酪氨酸酶(TYR)的方法，步骤包括：(1)对土豆进行粉碎匀浆、盐析、沉淀溶解和透析提取TYR粗酶；(2)利用FPLC的凝胶分子筛和/或阴离子交换层析提纯TYR；(3)用聚丙烯酰胺凝胶电泳和紫外分光光度计酶活测定对TYR进行表征。该方法快速、简便、廉价，而且纯化的TYR活性较高。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 土豆 快速 提纯 酪氨酸 方法 | ||
【主权项】：
1. 一种的从土豆中快速提纯酪氨酸酶的方法，包括下列步骤：(1)土豆浸泡在0. 005M～0.4M乙酸钠缓冲液(pH5.0-6.0)中高速匀浆1～5min，过滤，加入30％～80％硫酸铵溶液进行盐析，再用乙酸钠缓冲液溶解沉淀，0.005M～0.04M的Tris-HCl缓冲溶液(pH6.5～7.5)透析得TYR粗酶液；(2)利用FPLC的分子筛凝胶柱层析，用Sephodex G75分子筛凝胶柱，洗脱液：0.005M～0.05M的Tris-HCl缓冲溶液(pH6.0～7.5)，平衡：2个柱床，洗脱：1～2个柱床，流速：0.25～0.75ml/min，进行提纯；(3)和/或利用FPLC的HiTrap Q FF离子交换柱层析，用洗脱液A为0.001M～0.01M的Tris-HCl缓冲溶液(pH6.0～7.5)，洗脱液B为0.001M～0.01M的Tris-HCl缓冲溶液(pH6.5～7.5)+1M～2M的NaCl，平衡为10～25个柱床，冲洗为2～5个柱床，洗脱梯度为洗脱液B在5～10个柱床内保持3％～7％，然后在5个柱床内保持10％～15％，然后在5～10个柱床内保持20％～25％，然后在5～10个柱床内保持40％～50％，流速为0.75～1ml/min，进行提纯；(4)将阴离子层析和分子筛凝胶层析得到的收集峰用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)凝胶电泳和紫外分光光度法酶活表征。
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