[发明专利]一种带内支撑的组织工程化软骨的制备方法

摘要

本发明涉及医学组织工程技术领域，是临床上用作永久性假体的一种带有内支撑的组织工程化软骨的制备方法。本发明以不可降解、具有高稳定性的医用多孔高密度聚乙烯MEDPOR为材料制成预定形状和大小的内支撑支架，再用生物相容性好可被机体降解吸收的聚羟基乙酸(polyglycolic acid，PGA)无纺网包裹内支撑支架形成MEDPOR－PGA复合支架，然后将制备的自体骨髓基质干细胞悬液均匀滴于复合支架表面的PGA无纺网内，用含TGF－β₁、IGF－I、胰岛素的DMEM软骨向诱导液培养，经一定时间体外培养后植于皮下4－6周，即可构建出本发明组织工程化软骨。本发明用自体骨髓基质干细胞作为种子细胞制作带内支撑的组织工程化软骨假体，由于骨髓基质干细胞来源广，取材方便，体外培养增殖能力强，培养简单，因此可以制作出临床上所需的永久性植入体。

主权项

1.一种带内支撑的组织工程化软骨的制备方法，步骤如下：(1)制备自体骨髓基质干细胞悬液按常规在无菌条件下抽取自体骨髓，利用全骨髓贴壁培养法分离提纯BMSCs，CO2孵箱内培养，收集细胞制成细胞悬液备用；(2)生物材料支架的制备将MEDPOR制成预定的体积与形状，外裹PGA无纺网，制成MEDPOR-PGA复合支架；(3)细胞-支架复合及培养将MEDPOR-PGA复合支架清洗消毒后置入含10％胎牛血清的DMEM培养液预培养后，取出吸干，将上述(1)制备的自体BMSCs细胞悬液均匀滴加于复合支架表面，37℃、5％CO2、饱和湿度的CO2孵箱内培养培养2-4h后移入含10％FBS的DMEM的培养液内按常规继续培养，隔日换液一次，5-7天后改用软骨向诱导液继续培养，所说的软骨向诱导液为含TGF-β15-15ng/ml、IGF-I40-60ng/ml、胰岛素20-40ng/ml的DMEM培养液，3周后行皮下移植，皮下培养4-6周，即成带内支撑的组织工程化软骨。