[发明专利]纳米金银染增强技术检测痕量二恶英的生物学方法

摘要

本发明提供了一种纳米金银染增强技术检测痕量二恶英的生物学方法，该方法根据二恶英诱导芳香烃受体形成的复合物所具有的特异核酸结合特性，利用纳米金银染增强技术的高灵敏度，实现了对二恶英类污染物的简单、灵敏、快速检测，二恶英诱导所激活的芳香烃受体复合物经特异性抗体结合而被捕获在固相载体上，然后识别以纳米金为报告基团的二恶英反应元件探针，再通过纳米金催化的银染增强效应产生高灵敏的识别信号，适时记录其吸光度值，从而实现二恶英类物质的定量检测，该方法操作简便，检测周期短，可用于大量环境和生物样本二恶英检测的初筛，节约检测成本及时间。

主权项

1. 一种二恶英检测方法，包括以下步骤：(1)以动物肝脏组织制备的含芳香烃受体(AhR)和芳香烃受体核转位子蛋白(Arnt)的细胞溶质作为二恶英的特异受体；(2)以纳米金通过共价键合作用标记在巯基修饰的DRE探针上，该探针的核心序列为GCGTG；(3)将含芳香烃受体(AhR)和芳香烃受体核转位子蛋白(Arnt)的细胞溶质与含二恶英化合物的待测样本共同孵育形成二恶英-AhR-Arnt复合物；(4)抗Arnt或AhR抗体包被在酶标孔板载体，通过抗原抗体反应，将激活的AhR/Arnt复合物固定于该载体上；(5)将载体上所形成的二恶英-AhR-Arnt复合物与含有编码为GCGTG序列的纳米金标记DRE探针共同孵育，使之相结合；(6)利用银染增强技术使因复合物结合而保留下的探针的纳米金标记信号得以放大，并实时读取吸光度值，根据保留下的纳米金标记探针的量与诱导激活该复合物的二恶英的量成正比例关系的特点，采用2，3，7，8-四氯代二苯并二恶英(TCDD)制定标准曲线，从而计算得出待测样本中二恶英当量值(Toxic Equivalent Quantity，TEQ)。