[发明专利]一种利用固定化酶技术制备壳低聚糖或壳寡糖的方法

摘要

本发明公开了一种利用固定化酶技术制备壳低聚糖或壳寡糖的方法，该方法首先用反向悬浮交联法制备的多核结构磁性壳聚糖微球作为纤维素酶的固定化载体，将纤维素酶固定在磁性壳聚糖微球上成为固定化酶，然后用固定化酶水解壳聚糖，根据需要控制水解反应时间即可得到所需壳低聚糖或壳寡糖。这种制备壳低聚糖或壳寡糖的方法利用固定化酶技术，提高了酶对温度和pH的稳定性，实现了酶的重复使用，并且产物中几乎不含糖与酶蛋白的复合物，不会引起热原反应，特别适用于食品、医药等领域。

主权项

1.一种利用固定化酶技术制备壳低聚糖或壳寡糖的方法，其特征在于：首先用反向悬浮交联法制备粒径20～30um的多核结构磁性壳聚糖微球作为纤维素酶的固定化载体，将纤维素酶固定在磁性壳聚糖微球上成为固定化酶，然后用固定化酶水解壳聚糖，根据需要控制水解反应时间即可得到所需壳低聚糖或壳寡糖，所采用的具体步骤如下：(1)将0.1-1.0mol/L的FeSO4·7H2O与0.1-1.0mol/L的FeCl3·6H2O以摩尔比1∶3-1∶1的比例混合，加入3-10mol/L的NaOH，剧烈搅拌至得到油状的磁流体悬浮液，以悬浮液状态保存；(2)将壳聚糖溶于体积百分比浓度为1-5％的乙酸溶液，配成重量体积比为3-5％的壳聚糖溶液，加入与其体积比为1∶5-20的磁流体悬浮液，搅拌均匀，然后加入到与壳聚糖溶液同体积的油相分散介质液体石蜡，滴入乳化剂span80，高速搅拌使体系呈乳液状，继续搅拌至形成均匀的油包水的分散体系，再加入体积为分散体系1-4％的戊二醛作为交联剂，在35-45℃下反应充分后倒入5-10倍体积的NaOH/乙醇混合液中，维持搅拌一段时间，弃去油层和水层，洗去颗粒表面的吸附物，得到用作固定化载体的黑色多核结构磁性壳聚糖微球，所用NaOH/乙醇混合液中的NaOH和乙醇的体积比为1∶2-2∶1；(3)将与固定化载体重量比为0.1-0.5∶1的纤维素酶溶于0.05-0.4mol/L，pH为4.6-5.6的醋酸-醋酸钠缓冲溶液，在此酶溶液中加入磁性壳聚糖微球，室温下充分振荡，过滤除去酶溶液，再用缓冲溶液洗至无蛋白质检出，获得固定在磁性壳聚糖微球上的纤维素酶，即固定化酶；(4)将固定化酶加入到pH5.0-6.0的壳聚糖溶液中，加入的酶蛋白为壳聚糖质量的5-10％，在50-60℃反应至所需时间，过滤收集水解产物，得到壳低聚糖或壳寡糖。