[发明专利]一种从无花果树树叶中提取超氧化物歧化酶的方法

摘要

本发明涉及一种从无花果树树叶中提取超氧化物歧化酶的方法，属于生物技术领域，以新鲜无花果树树叶为原料，经抽提，盐析，离子交换层析，分子筛层析，制备出稳定的高活性的SOD。本发明所述无花果树树叶中SOD的提取制备，工艺简单、成本低、可扩大生产且环保无污染。本工艺提取的无花果树树叶SOD具有活性高和稳定性好等特点，在医药、保健品及化妆品工业中具有巨大的应用潜力。

主权项

1、一种从无花果树树叶中提取超氧化物歧化酶的方法，包括下列步骤：一、抽提选新鲜或低温保鲜的无花果树树叶100克，清洗，加入500～1000mL含0.1～0.5mM EDTA/0.1～0.5％甘油0.01～0.05％β-巯基乙醇、pH7.8的磷酸钠缓冲液，匀浆，抽提1～2小时，除渣过滤，5000～8000rpm离心10min；二、盐析向上清液中加入固体硫酸铵至40％饱和度，8000～10000rpm离心10min，向上清中补加硫酸铵至85％饱和度，静置1～2小时，8000～10000rpm离心10～20min。沉淀用50～80ml的5～10mM，pH7.8的磷酸钠缓冲液溶解，并在4℃下对该缓冲液透析40～60小时，8000～10000rpm离心5～10min，收集上清液；三、阴离子交换层析将上清液加入经5～10mM，pH7.8的磷酸钠缓冲液平衡的DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换柱，用5～10mM，pH7.8的磷酸钠缓冲液洗脱未结合的蛋白，采用5～10mM，pH7.8的磷酸钠缓冲液含0.1～0.2M的氯化钠洗脱目的蛋白，以紫外检测并收集蛋白峰，同时检测其酶活性，合并活性峰，冻干浓缩至3～5ml；四、Sephacryl S-100 HR凝胶过滤层析将前经冻干浓缩的样品，加入经5～10mM，pH7.8的磷酸钠缓冲液平衡的Sephacryl S-100 HR层析柱，用5～10mM，pH7.8的磷酸钠缓冲液洗脱，以紫外检测并收集蛋白峰，同时检测其酶活性，合并活性峰；进行酶活检测及相关鉴定。