[发明专利]一种以大豆子叶节再生植株的方法

摘要

本发明属于农业生产技术领域。是一种以大豆子叶节为外植体进行大豆器官发生和植株再生的方法。本发明在传统组织培养的基础上，以大豆子叶节为外植体进行器官发生途径再生系统的完善，在筛选有效的大豆种子消毒技术的基础上，突出了各种培养基成分的改进与优化，通过常规大豆品种的组织培养验证，可有效促进丛生芽的诱导、伸长和生根，提高无菌苗的质量和丛生芽的分化率，能够很好实现多数品种子叶节器官发生和植株再生过程，为大豆遗传转化和分子改良提供了坚实的技术支撑，对我国大豆高效育种和健康生产将具有重要的现实意义。

主权项

1.一种以大豆子叶节为外植体进行大豆器官发生和植株再生的方法，其特征在于采用了以下的方法与程序：a.无菌苗的获得取表面洁净的大豆种子用自来水冲洗15min后，放入70％乙醇溶液中处理50s，0.1％HgCl2溶液中处理5min，然后取出用无菌水洗4-5次，接到萌发培养基中，萌发培养基为B5-A盐、B5-B盐、M5-C盐、B5有机物、3％蔗糖、0.8％琼脂粉、2.0mg/L6-BA，pH值为5.8，培养条件为：温度25±1℃，光周期16/8h；b.子叶节的获得取萌发5-7d子叶鲜绿、子叶节处膨大的大豆无菌苗，在子叶节下3-4mm处切去下胚轴，纵向切开子叶，去顶芽、侧芽和种子根，每株无菌苗可获得来两个子叶节外植体；c.丛生芽的诱导将子叶按近轴面朝上插入添加1.7mg/L 6-BA和0.2mg/L GA3的诱导培养基中培养，诱导培养基的基本成分为MS无机物、B5有机物和500mg/L谷氨酰胺，培养条件为：温度25±1℃，光周期16/8h；d.丛生芽的伸长待丛生芽可见时，将外植体转入芽伸长培养基，转接时切去子叶及下胚轴基部的老化组织，每10d继带一次，培养条件为：温度25±1℃，光周期16/8h，芽伸长的培养基为B5盐、MS-C、B5-D、0.1mg/L IAA、10mg/L硝酸银、3％蔗糖、0.8％琼脂粉，0.34mg/L 6-BA、50mg/L Glu、0.5mg/L AG3、0.5mg/L ZT，pH值为5.8；e.丛生芽的生根与驯化带丛生芽长到3-4cm时，切下转入生根培养基进行培养，待丛生芽根生出并达到了3-4cm后，洗净根部的培养基，将生根的小植株移入液体生根培养基中炼苗3-5d，并打开瓶口，使无菌苗适应有菌的外界环境，然后将小植株取出移至营养钵的土壤中(蛭石∶草炭土∶细土＝1∶2∶2)培养驯化，套袋以保湿，然后逐渐降低湿度、增强光照。待小苗成活后，转入正常土壤中栽培，保持温、湿度和正常的光照直至结荚成熟，丛生芽生根培养基为1/2MSB、0.37mg/L NAA、2％蔗糖和0.8％琼脂粉，pH值为5.8。