[发明专利]一种快速跟踪监测采油注入菌变化的方法

摘要

一种快速跟踪监测采油注入菌变化并补注以提高采油量的方法。本发明方法包括：将注入菌菌体提取基因组DNA，采用16S rDNA V9区通用引物PCR扩增出对应浓度菌体提取的水样中元基因组的16S rDNA V9区条带，经梯度凝胶变性电泳后、经OD₂₅₄光密度扫描绘制随菌浓变化的光密度曲线作为标准曲线；用同样方法确定采油井中注入菌菌浓，绘制出随时间变化的菌浓曲线；参照油井采油量变化曲线分析起作用的注入菌和采油量升降的原因，确定对采油量影响的注入菌，待采油量下降后，发酵培养确定起主要作用而在油井中数量又明显减少的注入菌进行二次补注。本发明为突破限制外源微生物采油技术开发和应用的瓶颈提供了方法论和实践参考，对采油现场跟踪评价具有重要的指导意义。

主权项

1、一种利用梯度凝胶变性电泳技术快速跟踪监测采油注入菌变化的方法，其特征是该方法包括：第一、注入菌标准曲线的绘制：将注入菌在营养琼脂平板上划线培养分出纯的单菌落；单菌落接种至液体培养基培养至对数生长末期后用无菌水稀释至N种不同浓度的培养液，N为大于2的自然数，培养液分别经离心得到的菌体提取基因组DNA，采用16S rDNA V9区通用引物PCR扩增出对应浓度菌体提取的基因组的16S rDNA V9区条带，各PCR产物经梯度凝胶变性电泳后、经OD254 光密度扫描绘制随菌浓变化的光密度曲线作为标准曲线；第二、采油井中注入菌菌浓的确定：提取微生物采油注入菌液前后的水样，经除油、离心得到水样中混合菌体，将菌体按第一步中标准曲线绘制时的方法提取元基因组DNA、PCR扩增总16S rDNA V9区，将各时间点的总16S rDNA V9区和注入菌的标准16S rDNA V9区进行DGGE电泳，对照标准曲线找出各时间点的注入菌条带，根据目的条带的光密度在标准曲线上查出菌浓；第三、将上步确定的水样中注入菌菌浓绘制出随时间变化的菌浓曲线；第四、绘制与上步时间对应的采油量随时间变化的曲线；第五、比较第三步绘制的菌浓曲线和第四步绘制的采油量曲线，对照油井采油量变化曲线分析起作用的注入菌和采油量升降的原因，确定对采油量影响的注入菌，待采油量下降后，发酵培养起主要作用而又数量减少的注入菌进行二次补注。