[发明专利]一种提高马铃薯对PVX病毒和PVY病毒双抗性的基因的构建方法有效
| 申请号： | 200710061891.1 | 申请日： | 2007-05-15 |
| 公开（公告）号： | CN101092624A | 公开（公告）日： | 2007-12-26 |
| 发明（设计）人： | 白云凤;张维锋;王国英 | 申请（专利权）人： | 山西省农业科学院作物遗传研究所 |
| 主分类号： | C12N15/29 | 分类号： | C12N15/29;C12N15/62 |
| 代理公司： | 山西太原科卫专利事务所 | 代理人： | 朱源 |
| 地址： | 030031*** | 国省代码： | 山西;14 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种基因的构建方法，具体为一种提高马铃薯对PVX病毒和PVY病毒双抗性的基因的构建方法，解决现有提高马铃薯对两种病毒的双抗性的方法存在的多种问题，包括以下步骤，将PVX外壳蛋白基因全序列cp上的保守基因片段与具有相同酶切位点的PVY复制酶基因全序列NIb上的保守基因片段连接起来构成人工融合基因cn；将人工融合基因cn以正向和反向分别连接到内含子两侧，构建成人工融合基因的反向重复序列，人工融合基因cn的反向重复序列两端分别连有启动子和终止子。该融合基因的反向重复序列导入马铃薯后，其对两种病毒的双抗株率高，且抗性能达到高抗，甚至免疫水平，较易在生产上应用。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 提高 马铃薯 pvx 病毒 pvy 抗性 基因 构建 方法 | ||
【主权项】：
1、一种提高马铃薯对X病毒和Y病毒的双抗性基因的构建方法，其特征是包括以下步骤，(1)分别从感染PVX病毒和PVY病毒的植物体内经提取总RNA、RT-PCR扩增以及基因克隆工序得到PVX外壳蛋白基因全序列cp和PVY复制酶基因全序列NIb；(2)利用PCR扩增分别得到PVX外壳蛋白基因全序列cp和PVY复制酶基因全序列NIb上的一段保守基因片段；(3)酶切PCR扩增得到的PVX外壳蛋白基因全序列cp的保守基因片段，与具有相同酶切位点的PVY复制酶基因全序列NIb上的一段保守基因片段连接起来以构成人工融合基因cn；(4)将人工融合基因cn以正向和反向分别连接到一个内含子的两侧，构建成一个人工融合基因的反向重复序列，该序列即为提高马铃薯对X病毒和Y病毒的双抗性基因RNAiCN；(5)人工融合基因cn的反向重复序列两端分别连有启动子和终止子。
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