[发明专利]海雀稗幼穗离体培养植株再生技术

摘要

海雀稗幼穗离体培养植株再生技术，属于植物组织培养方法，现有的海雀稗离体培养技术存在着诱导产生的愈伤组织在继代培养过程中丧失绿苗分化能力、不宜用于体细胞突变体筛选和农杆菌介导法基因转化的缺陷，本发明以颖花分花时期的幼穗为外植体材料，在附加2，4－二氯苯氧乙酸2.0mg/L、6－苄基氨基嘌呤0.05mg/L的愈伤组织诱导培养基上获得浅黄色、干燥、颗粒状愈伤组织的数量占诱导产生的愈伤组织总数40％以上；在提高琼脂条－固化剂用量1倍的培养基上进行继代培养，愈伤组织保持颗粒状结构，经过连续3代继代培养的愈伤组织的绿苗分化率达98％。本方法适用于海雀稗微繁殖、体细胞突变体筛选和基因转化。

主权项

1、海雀稗幼穗离体培养植株再生技术，其特征在于：1)材料选用海雀稗处于颖花分花时期的幼穗为外植体材料；2)培养基基本培养基由MS大量元素、MS微量元素与B5维生素组成，添加蔗糖30g/L；愈伤组织诱导培养基和愈伤组织继代培养基：附加激素2，4-二氯苯氧乙酸1.0～5.0mg/L和6-苄基氨基嘌呤0.01～0.2mg/L；愈伤组织分化培养基：附加激素6-苄基氨基嘌呤1.0～3.0mg/L；在愈伤组织诱导培养基和愈伤组织分化培养基中，以8g/L的琼脂条作为固化剂；在愈伤组织继代培养基中，以12～16g/L的琼脂条作为固化剂；上述各种培养基在高压灭菌前用氢氧化钠和盐酸调整pH值至5.8；3)培养方法取处于颖花分花时期的幼穗，在超净工作台上用70％的酒精彻底擦拭包在幼穗外部的叶鞘和茎，剥出幼穗，切成2～3mm长的段块，接种在愈伤组织诱导培养基上，在散射光下培养，15d左右从幼穗诱导产生出浅黄色、干燥、颗粒状的愈伤组织；挑选浅黄色、干燥、颗粒状的愈伤组织转移到愈伤组织继代培养基进行继代培养，经过连续3次继代培养后的颗粒状愈伤组织再转移到愈伤组织分化培养基上，在光照条件下培养，15d左右分化出绿苗；在离体培养过程中培养室温度为26±2℃。