[发明专利]新铁炮百合制种亲本组培快繁和杂交制种方法

摘要

本发明公开了新铁炮百合制种亲本组培快繁和杂交制种方法，属于植物组培快繁和杂交制种技术领域。该方法包括：培养基的制备，取百合未成熟胚为外植体，经诱导、增殖、鳞茎膨大培养、冷藏、移栽、病毒检测后，进而利用无毒试管鳞茎苗，进行大田种植、开花、杂交制种，获得大量新铁炮百合无毒种子。本发明的优点是：接种操作容易、污染率低、成活率高、种性变异率低、杂交制种纯度高，种子质量好，并缩短了诱导培养周期，降低了成本，实用性强，便于推广应用。

主权项

1、新铁炮百合制种亲本组培快繁和杂交制种方法，其特征在于按如下步骤进行：(1)培养基的制备、备用：包括基本培养基和组培各阶段培养基的组分与各组分在每升培养基内所含重量为：a)基本培养基：诱导和增殖培养基选用白糖为30～60g/L，琼脂粉为4.0g/L的MS基本培养基，pH为5.8；试管鳞茎膨大培养基选用白糖为70～90g/L，琼脂粉为4.0g/L的MS基本培养基，并另加甘露醇1.0～5.0g/L，AC1.0～5.0mg/L，pH为6.0；b)诱导培养基：MS+6-BA 0.5～2.0mg/L+IBA 0.1～0.5mg/L；c)增殖培养基：MS+6-BA 0.1～1.0mg/L+IBA 0.1～0.5mg/L；d)鳞茎膨大培养基：MS+NAA 0.1～0.5mg/L；(2)外植体的选取与灭菌处理：分别取新铁炮百合杂交组合之父本与母本的自交未熟果子，经灭菌处理后，取其所含种子未成熟胚作为组培的外植体；(3)诱导培养：将步骤(2)父本与母本的未成熟胚分别接种在诱导培养基上，在温度20±2℃，光照时间12h/d，光照强度2000～3000Lx的环境条件下，培养20～25d，子叶伸长至0.8～1.0cm，子叶基部形成白色鳞茎状组织时，再培养50d左右，不经愈伤组织阶段，直接形成鳞茎芽和/或无根组培苗；将组培瓶鳞茎芽和/或无根组培苗置于3～5℃低温处理45～60d，使鳞茎感应低温，促进组培苗生长活性提高；(4)增殖培养：将步骤(3)鳞茎芽和/或无根组培苗的叶片和部分基部组织切除，根据鳞茎大小纵向分切成2～6块带有鳞茎基部组织的鳞茎切块，接种在增殖培养基上，在温度20±1℃，光照时间12h/d，光照强度1000～3000Lx的环境条件下，培养20d后，每个切块增殖2～5个鳞茎芽，再培养40d形成有根或无根组培苗；(5)鳞茎膨大培养：将步骤(4)的有根或无根组培苗切除根和叶片，将鳞茎接种在鳞茎膨大培养基上，在温度20±2℃，黑暗条件下培养60～70d，直接生成直径0.8～1.2cm，重0.6～1.1g的父本和母本的试管鳞茎；(6)低温处理：将步骤(5)试管鳞茎出瓶后用清水清洗，包裹于消毒过的泥炭中，经10～12℃预处理10～20d，再在3～5℃处理50～60d，至打破休眠；(7)移栽：将步骤(6)试管鳞茎移栽到以70％泥炭和30％珍珠岩混合基质的穴盘中，至幼苗长3～5片真叶时定植大田；(8)病毒检测：采用RT-PCR法检测百合LSV、LMoV病毒；(9)杂交制种：选择适宜时期，在土壤肥沃，排水良好的田块进行制种，塑料大棚的门及四周通风处安装25目防虫网，防止蚜虫及其它昆虫侵入传染病毒；将步骤(8)检测无病毒的父本苗和母本苗分别定植在邻近的大棚内，每个30米×6米标准大棚内定植5000～6000株；8月下旬至9月中，当母本花朵接近开放，在花药未成熟裂开前，在严格隔离条件下人工去除花药，在母本柱头表面形成大量粘液时，将当天采集的已形成大量可散开花粉粒的父本成熟花药，用手指小心地把花粉涂抹在母本的柱头上进行杂交授粉，第二天再次同样方法进行授粉以提高杂交结实率；果子发育至成熟阶段加强大棚保温工作，白天适当通风，定期进行叶枯病药剂防治，加强肥水管理，增施磷钾肥有利于提高种子饱满度，保证果子正常成熟，至果子正常成熟后分批采收。