[发明专利]用工程菌生产5－氨基乙酰丙酸的方法

摘要

本发明涉及用工程菌生产5－氨基乙酰丙酸的方法。该方法包括以下步骤：1)用LB培养基平板活化保藏编号为CGMCC No.1939工程菌Rosetta(DE3)－pET28a－R.S.hemA；2)将平板上的单克隆接种于LB培养基摇瓶中，在37℃过夜培养，得到一级种子；3)取一级种子接种于LB培养基的摇瓶中培养，得到二级种子；4)将二级种子接种于含发酵培养基的发酵罐中进行发酵培养，用异丙基－β－D－硫代半乳糖苷降温诱导，继续培养一段时间后进行补料培养。本发明工艺简单、可控性高、成本低、发酵过程对环境友好，所得的胞外ALA产量高，具有广阔的工业化前景。

主权项

1.用工程菌生产5-氨基乙酰丙酸的方法，其特征是包括以下步骤：1)用接种针从保藏编号为CGMCC No.1939工程菌Rosetta(DE3)-pET28a-R.S.hemA的甘油管中蘸取菌液，在含有30-50μg/ml卡那霉素和30-50μg/ml氯霉素的LB培养基平板上划线后，置于37℃烘箱中过夜培养，保藏编号为CGMCCNo.1939工程菌，分类命名：中文名为大肠埃希氏菌，拉丁文学名为Escherichiacoli Rosetta(DE3)-pET28a-R.S.hemA；2)将平板上的单克隆接种于含30-50ml LB培养基的250ml摇瓶中，转速为200-220rmp，在37℃过夜培养，得到一级种子；3)取1ml-5ml一级种子接种于含50-100ml发酵培养基的500ml的摇瓶中培养3-4h，得到二级种子；4)将50-100ml二级种子接种于含2-3L发酵培养基的5L发酵罐中进行发酵培养，使罐上的初始菌液密度OD600为0.08-0.15，发酵罐转速为400-600rpm，空气流量为1-2L/min，起始培养温度为37℃，2h后降至26-30℃，再用0.05-0.2mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导；5)诱导培养4-8h后流加补料培养基，在菌体密度OD600达到8-12时，分批补加葡萄糖作为5-氨基乙酰丙酸脱水酶的抑制剂；6)发酵培养初始pH采用10％-20％体积分数的稀硫酸控制在5.8-6.0；诱导培养4-8h后通过流加补料培养基控制pH为6.1-6.3。