[发明专利]一种表达型前T载体及其制备与应用

摘要

本发明提供了一种可用于快速克隆和表达目的基因PCR产物的一种表达型前T载体，及其制备与应用。本发明的有益效果主要体现在：一步法使目的基因克隆并得到表达，省略复杂的重组过程；在构建过程中无需对PCR产物进行纯化、酶切，前T载体用XcmI单酶切即可得到线性化的T载体，酶切效率高，无需使用其他限制性内切酶参与；目的基因无需使用价格昂贵的IPTG诱导，可以低成本地进行大规模工程菌发酵；可在目的基因得到表达后再进行测序鉴定，将表达结果符合期望的转化子送DNA测序公司测序可以提高测序成功率，节约经费。

主权项

1.一种表达型前T载体，由以下方法制备得到：(1)通过PCR扩增得到含有色氨酸酶启动子和核糖体结合位点的DNA片段1；(2)以含有氨苄青霉素除外的大肠杆菌敏感的抗生素的抗性基因的质粒为模板进行PCR扩增，在引物的5’末端引入XcmI酶切位点，扩增得到含有所述抗生素的抗性基因及其上下游表达调控序列、两端含有XcmI酶切位点的DNA片段2；(3)利用重叠延伸拼接技术，将步骤(1)得到的DNA片段1和步骤(2)得到的DNA片段2进行拼接；(4)将步骤(3)所得拼接产物克隆至pUCmT载体中，筛选正向连接的克隆，即得所述表达型前T载体。