[发明专利]一种前T载体及其制备与应用无效
| 申请号： | 200710069815.5 | 申请日： | 2007-06-29 |
| 公开（公告）号： | CN101333538A | 公开（公告）日： | 2008-12-31 |
| 发明（设计）人： | 林陈水;于真真;许明;任慧颖;杨丹燕 | 申请（专利权）人： | 浙江工业大学 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63;C12N15/66 |
| 代理公司： | 杭州天正专利事务所有限公司 | 代理人： | 黄美娟;袁木棋 |
| 地址： | 310014*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种前T载体，由以下方法制备得到：(1)以含有氨苄青霉素除外的大肠杆菌敏感的抗生素的抗性基因的质粒为模板进行PCR扩增，在引物的5’末端引入Xcm I酶切位点，扩增得到含有所述抗生素的抗性基因及其上下游表达调控序列、两端含有Xcm I酶切位点的DNA片段；(2)用T4DNA连接酶将步骤(1)得到的DNA片段和pUCmT载体进行连接；(3)将步骤(2)所得连接产物转化大肠杆菌DH5α或JM109，筛选阳性克隆，即得所述前T载体。本发明的有益效果主要体现在：用本发明前T载体制备得到的载体可用于快速克隆PCR产物，筛选阳性克隆过程中不需要使用X－gal、阴性率低。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 载体 及其 制备 应用 | ||
【主权项】：
1.一种前T载体，由以下方法制备得到：(1)以含有氨苄青霉素除外的大肠杆菌敏感的抗生素的抗性基因的质粒为模板进行PCR扩增，在引物的5’末端引入XcmI酶切位点，扩增得到含有所述抗生素的抗性基因及其上下游表达调控序列、两端含有XcmI酶切位点的DNA片段；(2)用T4DNA连接酶将步骤(1)得到的DNA片段和T载体进行连接；(3)将步骤(2)所得连接产物转化大肠杆菌DH5α或JM109，筛选阳性克隆，即得所述前T载体。
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