[发明专利]牛奶样品布氏杆菌套式PCR检测方法无效
| 申请号： | 200710070130.2 | 申请日： | 2007-07-20 |
| 公开（公告）号： | CN101100693A | 公开（公告）日： | 2008-01-09 |
| 发明（设计）人： | 周继勇;郭军庆;杜振昆 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 杭州中成专利事务所有限公司 | 代理人： | 冯子玲 |
| 地址： | 310029浙江省杭州市江干区*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明牛奶样品布氏杆菌套式PCR检测方法涉及基因工程技术。根据布氏杆菌16S rRNA基因序列，设计合成套式PCR的外向引物和内向引物；用优化CTAB-NaCl法提取牛奶样品细菌染色体DNA，以外向引物和内向引物进行二次PCR扩增，凝胶电泳检查PCR产物，建立牛奶样品布氏杆菌套式PCR检测方法。该方法可直接从牛奶样品中检出污染布氏杆菌，对牛奶样品中布氏杆菌的检测下限达3.3CFU/mL，与大肠杆菌、溶血性链球菌、沙门氏菌、克雷伯氏杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和螺旋杆菌等细菌不存在非特异扩增，具有特异性强、敏感性高和实用性强等优点，可为奶牛布氏杆菌病普查和监测，以及牛奶制品食品安全监控提供新的技术手段。 | ||
| 搜索关键词： | 牛奶 样品 杆菌 pcr 检测 方法 | ||
【主权项】：
1.一种牛奶样品布氏杆菌套式PCR检测方法，其特征在于以下步骤：(1)将牛奶样品沉淀用NET溶液悬浮，在悬浮液中加入10％十二烷基磺酸钠(SDS)，至SDS在悬浮液的终浓度的重量体积比为3.4％，裂解牛奶样品沉淀，获牛奶样品裂解液；(2)在每毫升牛奶样品裂解液中加入1毫克蛋白酶K和1毫克RNaseA消化，获牛奶样品裂解消化液；(3)以CTAB-NaCl法从牛奶样品裂解消化液中提取牛奶样品细菌染色体DNA；(4)用套式PCR引物直接从牛奶样品细菌染色体DNA中检测布氏杆菌特异性DNA片段。
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