[发明专利]一种同位素标记的抗MHCII单克隆抗体的应用

摘要

本发明提供一种用同位素标记的单克隆抗体的应用，是将¹⁸⁸Re标记至2E9/13单抗上经透析，纯化，浓缩，过滤后制备成¹⁸⁸Re－2E9/13F(ab)₂，构建体外单向混合淋巴细胞反应模型，并将该抗体应用于模型中，检测抗体对细胞免疫排斥抑制作用。本发明改变以往运用单一方法建模的手段，结合生物学和核医学两种方法，在体外由同种异源淋巴细胞所构建的免疫排斥模型中引入了¹⁸⁸Re标记的抗MHC－II分子的单克隆抗体2E9/13F(ab)₂片段，解决了永久性下调同种异体MHCII类抗原的免疫原性问题，本发明设计合理，具有实用性和有效性，为动物体内实验和最终应用于临床提供了有力的实践支持和理论基础。

主权项

1.一种用同位素标记的抗MHCII单克隆抗体的应用，其特征是：将188Re标记至2E9/13单抗上经透析，纯化，浓缩，过滤后制备成188Re-2E9/13F(ab)2，构建体外单向混合淋巴细胞反应模型，并将该抗体应用于模型中，检测抗体对细胞免疫排斥抑制作用，具体通过以下步骤实现：(1)制备188Re-2E9/13 F(ab)2：①通过木瓜蛋白酶水解2E9/13单抗后提取其中的F(ab)2片段，并经过过滤，纯化，浓缩，置于-20℃冰箱中保存；②从188W-188Re发生器中获取188ReO42-洗脱液，按直接制备法将188Re标记于F(ab)2片段上，制备成188Re-2E9/13 F(ab)2片段；(2)建构体外单向混合淋巴细胞培养模型：①分别设阳性对照组A，为生理盐水处理后的刺激细胞+反应细胞，单抗组B，为单抗处理后的刺激细胞+反应细胞，同位素标记单抗组C，为同位素标记单抗处理后的刺激细胞+反应细胞，阴性对照组D，为反应细胞，每个组又设为48，72，96，120小时不同反应时间，收获细胞后做MTT测试；②分组如①，每组设72和120小时不同反应时间，收获细胞后做RT-PCR，并进行对比分析。