[发明专利]一种高增殖力、高细胞毒活性CIK细胞的制备方法

摘要

一种高增殖力、高细胞毒活性CIK细胞的制备方法，它涉及一种细胞的制备方法。它解决了现有的CIK细胞增殖力差、细胞毒活性低的问题。细胞制备：向单个核细胞内加入基因重组人细胞因子IFN－γ、CD3单抗体蛋白及基因重组人细胞因子IL－2、IL－12和IL－1，再在37℃、CO₂浓度为5％、湿度为100％的环境中继续培养7～24天，即得到高增殖力、高细胞毒活性CIK细胞。本发明采用基因重组人细胞因子IL－2和IL－12联合诱导CIK细胞，细胞因子的联合应用可以对淋巴细胞的扩增产生协同作用，比使用单一细胞因子诱导细胞的扩增倍数提高了约1倍，且减少了因大剂量单因子应用所产生的毒副作用。本发明制备出的CIK细胞的细胞毒活性明显高于现有CIK细胞50％以上，而且细胞毒活性可维持2～3周，CIK细胞最高杀伤率出现在培养的第13～15天。

主权项

1、一种高增殖力、高细胞毒活性CIK细胞的制备方法，其特征在于高增殖力、高细胞毒活性CIK细胞按以下步骤制备：将单个核细胞用含10％胎牛血清的RPMI 1640培养基悬浮2h，之后加入基因重组人细胞因子IFN-γ，使悬浮液中IFN-γ的浓度为1000U/mL，继续培养24h后加入CD3单抗体蛋白及基因重组人细胞因子IL-2、IL-12和IL-1，使培养液中CD3单抗体蛋白的浓度为100ng/mL、细胞因子IL-2的浓度为600U/mL、细胞因子IL-12的浓度为5ng/mL、细胞因子IL-1的浓度为100U/mL，然后再在37℃、CO2浓度为5％、湿度为100％的环境中继续培养7～24天，即得到高增殖力、高细胞毒活性CIK细胞；其中加入CD3单抗体蛋白和基因重组人细胞因子IL-2、IL-12和IL-1后每隔3天半量换液，并补加IL-2和IL-12以保持培养液中的浓度不变；加入CD3单抗体蛋白和基因重组人细胞因子IL-2、IL-12和IL-1后第6天再补加CD3单抗体蛋白，使培养液中CD3单抗体蛋白的浓度达到100ng/mL。