[发明专利]基因工程制备人毛乳头细胞HSPC016蛋白质的方法、表达载体和工程菌

摘要

本法发明涉及一种基因工程人毛乳头细胞HSPC016基因的表达载体，该载体为含有人毛乳头细胞HSPC016基因功能序列的质粒pET－22b(+)，HSPC016编码序列位于pET－22b(+)载体上Nde I和Xho I酶切位点之间，载体是pET－22b(+)。本发明还涉及一种被上述载体所转化的基因工程菌，并提供制备人毛乳头细胞HSPC016目的蛋白的方法，通过IPTG诱导大肠杆菌pET－22b(+)/HSPC016/BL21表达目的蛋白HSPC016。本发明的优点在于：目的蛋白质表达量高，表达率在28％以上；加入6×His纯化标签，利于蛋白纯化；选择pET－22b(+)作为表达可溶性外源蛋白HSPC016的载体，既保证了目的蛋白的高表达，又维持了目的蛋白在合成过程中形成的正确构象，保持了生物学活性。

主权项

1.一种基因工程人毛乳头细胞HSPC016基因的表达载体，其特征在于：该载体为含有人毛乳头细胞HSPC016基因功能序列的质粒pET-22b(+)，HSPC016编码序列位于pET-22b(+)载体上Nde I和Xho I酶切位点之间，载体是pET-22b(+)；克隆HSPC016基因的引物为：P1 5’-CATATGTCCGGCCGCGAAGGT-3’(Nde I)P2 5’-CTCGAGCTTTTTGCCAGATTTCT-3’(XhoI)。在引物P2的设计中，已经去掉HSPC016基因ORF的终止密码子，使表达的蛋白带上载体pET-22b(+)的Xho I酶切位点之后序列翻译的6×His纯化标签。