[发明专利]准确鉴定鲶和大口鲶的试剂盒及其鉴定方法

摘要

本发明提供了一种准确鉴定鲶和大口鲶的试剂盒及其检测方法，该试剂盒包括DNA提取试剂，包括试剂1、试剂2、试剂3、试剂4和试剂5；聚合酶链式反应试剂，包括反应预混试剂6和试剂7；电泳和显色试剂，包括试剂8、试剂9、试剂10和试剂11。本发明特别提供一对特异引物NS和NA，利用该对引物进行PCR扩增反应可准确鉴定鲶和大口鲶，特点是准确、批量、对鉴定鱼损伤轻，不会导致被鉴定活鱼死亡。

主权项

1、一种准确鉴定鲶和大口鲶的试剂盒，包括DNA提取试剂、聚合酶链式反应试剂、电泳和显色试剂：(a)DNA提取试剂，包括试剂1：DNA提取缓冲液：10mmol/L Tris-HCl，pH8.0；2mmol/L EDTA，pH8.0；0.4mol/L NaCl，1％SDS；试剂2：蛋白酶K 20mg/mL；试剂3：氯化钠6mol/L；试剂4：异丙醇；试剂5：70％乙醇；(b)聚合酶链式反应试剂：包括反应预混试剂6和试剂7；试剂6：含有10倍聚合酶链式反应缓冲液，其中含MgCl2 15mM，2.5μl；特异引物NS0.5-0.75μl，10μM和NA 0.5-0.75μl，10μM、四种脱氧核苷酸的混合物0.5μl，每种10μM和灭菌双蒸水19.375-20.375μl；试剂7：Taq酶，5U/μl；(c)电泳和显色试剂，包括试剂8、试剂9、试剂10和试剂11；试剂8：为50倍电泳缓冲液，含三羟基甲基氨基甲烷-乙酸和乙二胺四乙酸，浓度分别为0.04M和0.001M；试剂9：为凝胶加样缓冲液，含w/v为40％的蔗糖和0.25％的溴酚蓝和二甲苯青FF；试剂10：电泳级琼脂糖；试剂11：溴化乙锭，0.5μg/μl：