[发明专利]一种检测核酸多态性的核酸扩增方法

摘要

本发明提供了一种检测核酸多态性的核酸扩增方法，该方法是利用基本结构如图所示的探针与靶分子杂交，所形成的探针－靶分子杂交体存在一个碱基的空隙，然后通过聚合－连接反应补平探针－靶分子杂交体中的空隙，使探针的两个单体连成一条单链作为下一步PCR扩增所用的模板，最后通过检测PCR扩增产物来进行靶分子的核苷酸多态性分析。该方法的优点在于PCR扩增所用的模板仅需要通过聚合－连接反应即可获得，可以省去了酶切或延伸等步骤，提高了检测的效率。

主权项

1、一种检测核酸多态性的核酸扩增方法，该方法包括以下步骤：(1)设计并制备LDPP探针，所述的LDPP探针包括上游寡核苷酸单体和下游寡核苷酸单体；其中，上游寡核苷酸单体的5’-和3’-端分别是通用序列区和互补区，下游寡核苷酸单体的5’-和3’-端则分别是互补区和通用序列区；上游和下游寡核苷酸单体以头-尾毗邻的方式与靶分子的同一条核酸单链的相应序列互补，并且，在LDPP探针-靶分子杂交体中，上游和下游寡核苷酸单体的头-尾之间仅仅存在一个碱基的间隙；(2)设1～4个反应体系，每个反应体系均加入靶分子和至少一种LDPP探针，然后在三磷酸脱氧核糖核苷酸、DNA聚合酶和DNA连接酶存在的条件下进行聚合-连接反应，每个反应体系中所述的三磷酸脱氧核糖核苷酸分别为dATP、dTTP、dCTP和dGTP中的一种；(3)以步骤(2)所得的反应产物作为反应模板，加入与LDPP探针相应的通用引物进行PCR扩增；所述的通用引物，其中一条通用引物与探针中一条寡核苷酸单体的通用序列区的序列相同，另一条通用引物则与探针中的另一条寡核苷酸单体的通用序列区的序列互补；(4)检测步骤(3)所得的扩增产物，根据每个反应体系的是否存在扩增产物及其丰度来进行定性和/或定量分析。