[发明专利]大鼠结肠成纤维细胞培养方法

摘要

本发明提供了一种大鼠结肠成纤维细胞培养方法，其原代细胞培养包括如下步骤，首先分离结肠组织之后，用含1000UI/ml青霉素和1000UI/ml链霉素的PBS漂洗，剪成块状，置于0.25％胰蛋白酶∶0.02％EDTA＝1∶1的混合消化液中进行消化，收集上清液终止消化、进行离心，离心之后弃上清液，加入培养液于离心管中，制备细胞悬液，调整细胞浓度并接种于培养板中。本发明所需的消化酶单一，操作简单能在短时间内获取大量细胞并污染机会小。

主权项

1、一种大鼠结肠成纤维细胞培养方法，其特征在于：其大鼠结肠成纤维细胞原代培养依次包括如下步骤：a)处死老鼠，剪取自肛门向近端结肠5～10cm，含1000UI/ml青霉素和1000UI/ml链霉素的PBS漂洗干净，其组织块置75％酒精内浸泡30s；b)步骤a)得到的组织用含1000UI/ml青霉素和1000UI/ml链霉素的PBS反复漂洗7～10分钟，取出组织块置35mm培养皿内用PBS漂洗1～5分钟，快速剪成体积为1～3mm3的块状；c)置于0.25％胰蛋白酶∶0.02％EDTA＝1∶1(体积比)的混合消化液中，在5％CO2，37℃条件下消化6个5～10分钟；d)弃第1个5～10分钟的上清液，收集第2～6个5～10分钟的上清液于15ml离心管中，加入5～8ml含10％EBS的DMEM/F-12终止消化，在4℃，800rpm离心8分钟；e)弃上清液，加入4ml含10％FBS的DMEM/F-12于15ml离心管中，用滴管反复吹打制备细胞悬液，进行细胞计数并调整细胞浓度并调整细胞浓度，按1×105～1×106个/ml接种于24孔培养板中；f)加入含100UI/ml青霉素、100UI/ml链霉素及终浓度为10％FBS的DMEM/F-12培养液进行培养。