[发明专利]一种三磷酸胞苷二钠的制备方法及应用

摘要

本发明涉及一种三磷酸胞苷二钠的制备方法。其特点是：以胞苷酸(CMP)为原料经酶促转化，再经离子交换柱层析、分离纯化而成。酶促转化反应机理：发酵啤酒酵母获得酶促转化反应所需要的酶液，啤酒酵母能产生多种生物酶，其中有有很强糖酵解能力的糖酵解酶和磷酸化酶，糖酵解酶酵解葡萄糖产生的生物能，经ATP转移到胞苷酸，再在磷酸化酶的作用下使胞苷酸与磷酸根结合形成胞苷三磷酸。经过工艺优化，已经形成一个成本低、操作简便、收率高、成品纯度高的生产工艺，主要过程是：获得酶液，加入主料胞苷酸以及反应所需的适量的磷酸二氢钾等盐和葡萄糖进行酶促转化，再经沉淀、离子交换柱层析、分离纯化、精制、真空干燥而制得成品。

主权项

1、一种三磷酸胞苷二钠的制备方法，主要步骤包括：1)发酵啤酒酵母获得酶促转化反应所需要的粗酶液。2)溶解胞苷酸、磷酸二氢钾、氯化镁、葡萄糖，制备底物溶液，将反应缸升温至37℃，搅拌下加入粗酶液，反应缸保温30-32℃使胞苷酸转化。3)转化完毕后加入硅藻土，搅拌，离心，得离心上清液。4)在离心上清液中加入强酸性阳离子交换树脂，搅拌，加酸调pH为1.2-4.0，静置，过滤，得滤液。5)上步骤滤液中加入乙醇，至含醇量达50％以上，静置，过滤，收取滤饼。6)离子交换柱层析：将滤饼加水溶解，过滤，调pH为2.0-2.5，上树脂分离柱，当下水口流出液中的三磷胞苷浓度为进样前的70％左右时停止进样。用浓度梯度氯化钠溶液洗脱。7)上述洗脱液中，加入药用活性炭，搅拌，过滤，收集滤液。8)上述滤液调pH为3-4，加入药用酒精，放置使沉淀，收集沉淀。9)抽滤，以去掉三磷酸胞苷二钠部分水份，即得三磷酸胞苷二钠纯品。10)真空干燥及包装。