[发明专利]凝血酶原分离及其激活的方法

摘要

本发明涉及一种凝血酶原分离及其激活的方法，该方法利用透析或超滤控制凝血酶原粗提液的电导率的方法，使凝血酶原粗提液中的杂蛋白和凝血酶原在不同的电导率下发生沉淀，从而使凝血酶原和杂蛋白分离。另一方面，选用碳酸钙(CaCO₃)作为激活剂对凝血酶原进行激活。本发明工艺方法简单、操作容易，避免了使用有机溶剂，而且所得到的凝血酶产品的比活力要明显优于现有方法，适用于工业化生产。

主权项

1.一种凝血酶原分离及其激活的方法，其特征在于其步骤为：a.将新鲜血液加入0.38wt％柠檬酸钠作抗凝剂，离心取上清液得抗凝血浆；b.将血浆稀释10倍后，调节pH至5.0～5.5进行等电点沉淀，收集凝血酶原粗品沉淀；c.用浓度为0.075wt％的草酸钾和0.85wt％的氯化钠混合液溶解粗品沉淀，进行提取；d.用透析或超滤方法降低提取液中的电导率到400μs/cm，离心，除去沉淀物，将清液继续透析或超滤使其电导率进一步下降到150～5μs/cm，离心取沉淀物即为凝血酶原沉淀；e.用0.9wt％的NaCl溶液对凝血酶原沉淀进行溶解，离心除去不溶物，得凝血酶原溶液；f.加入pH6.8～8.0的Tris-HCl缓冲液，使其终浓度达到0～0.2mol/L，再加入0.25～2.0wt％CaCO3于5～45℃激活温度下激活1～13分钟后，离心除去沉淀，所得清液即为凝血酶溶液。