[发明专利]DC－SIGN启动子荧光素酶报告质粒的构建方法无效
| 申请号： | 200710156503.8 | 申请日： | 2007-11-06 |
| 公开（公告）号： | CN101182539A | 公开（公告）日： | 2008-05-21 |
| 发明（设计）人： | 吴南屏;许利军;靳昌忠 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/65 | 分类号： | C12N15/65 |
| 代理公司： | 杭州中成专利事务所有限公司 | 代理人： | 冯子玲 |
| 地址： | 310003浙江省杭州市上城区*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了DC－SIGN启动子荧光素酶报告质粒的构建方法。通过构建DC－SIGN启动子片段与荧光素酶报告载体pGL3－Basic的重组真核表达质粒DC－promoter－pGL3－Basic，并将该质粒在Hela、Hacat、Wish和HuVEC细胞株中进行表达和活性鉴定，本发明成功构建了DC－promoter－pGL3－Basic DC－SIGN启动子荧光素酶报告质粒。通过在Hela、Hacat、Wish和HuVEC细胞株进行表达和荧光素酶活性检测，证明了DC－SIGN启动子在不同细胞株中表达活性不同，在表皮细胞来源的HaCat和上皮来源的Hela细胞株中表达活性相对较高。 | ||
| 搜索关键词： | dc sign 启动子 荧光 报告 质粒 构建 方法 | ||
【主权项】：
1.DC-SIGN启动子荧光素酶报告质粒的构建方法，其特征在于下述步骤：(1)参考GeneBank AF209479的DC-SIGN启动子序列，设计DC-SIGN启动子的一对引物，在5’端和3’端分别引入Mlu I和Bgl II识别位点：ACGCGT和AGATCT，用PCR法高保真扩增DC-SIGN启动子片段，并纯化PCR产物，备用；(2)对DC-SIGN启动子片段和它的表达载体pGL3-basic分别进行双酶切，并将纯化后的酶切产物进行连接，连接产物转化DH-5α感受态细胞，挑单个白色菌落扩增，抽提重组质粒DNA，作双酶切鉴定。
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