[发明专利]诱导山苍子丛生芽的方法

摘要

本发明涉及一种诱导山苍子丛生芽的方法，采用山苍子的含节茎段为外植体，采用3％的H₂O₂和含1～5％吐温－80的0.1％HgCI₂溶液浸泡并不断用软毛刷刷拭，以此来代替酒精消毒，高效灭菌的同时保证了足够的有效外植体数量；接种初期采用转换培养基和暗培养的方法控制材料的褐化；芽诱导培养阶段加入GA，增殖培养阶段选用增殖培养基和诱导培养基交替使用的方法，芽萌发时间提前，迅速进入增殖状态，得到的芽苗健壮整齐。采用本发明诱导繁殖山苍子，不受外界条件的影响，四季皆可进行，不仅节约育苗占地，降低生产成本，并且保存了母体的全部优良性状，遗传性状稳定。本发明可在短期内形成大量优良试管苗，进行规模化、工厂化生产。

主权项

1.一种诱导山苍子丛生芽的方法，其特征在于包括如下步骤：1)外植体灭菌：选取山苍子干基部幼嫩枝条，去除叶片，清洗后放入质量浓度为3％的H2O2中浸泡15～20分钟，取出立即转入含质量浓度为1～5％吐温-80的0.1％HgCI2溶液中浸泡10～20分钟，其间不断用软毛刷刷拭枝条，然后取出用无菌水冲洗5～6次并用灭菌吸水纸将水吸干，继而切取含节茎段作外植体，迅速接种在MS培养基上，放入暗处培养，第二天将外植体转接到新的MS培养基上；2)芽诱导：将在MS培养基上不再褐化的外植体转入诱导培养基中，诱导培养基为MS+6-BA0.5～1.0mg/L+IBA0.1～0.5mg/L+GA1.0～2.0mg/L+琼脂7.0g/L+蔗糖30g/L，pH6.0；培养温度为25±2℃，光照周期12～14h.d-1，光强度为1200～2000lux；诱导培养21天后，获得诱导芽；3)芽增殖：切取单个诱导芽，去除2/3叶片，切取含节的茎段接种到增殖培养基上，增殖培养基为MS+6-BA1.0～2.5mg/L+IBA0.2～0.5mg/L+琼脂7.0g/L+蔗糖30g/L，pH6.0；培养25～30天，获得增殖芽；4)将增殖芽重复步骤2)、步骤3)进行继代培养，获得健壮山苍子丛生芽。