[发明专利]兔抗大沙鼠免疫血清

摘要

一种兔抗大沙鼠免疫血清，包括：a.大沙鼠血清IgG抗原的制备：采集大沙鼠血液，离心分离大沙鼠血清；将血清中加入饱合硫酸铵溶液，冷藏，再高速离心操作去除血清中的杂物及纤维蛋白；取上清液再补加饱合硫酸铵，冷藏，再进行高速离心弃上清液留取沉淀物，即为大沙鼠血清中的粗提IgG；经纯化后的大沙鼠IgG装入透析袋透析过夜；b.兔抗大沙鼠IgG抗体的制备：选取实验兔；吸取上述大沙鼠IgG抗原，沿兔背脊柱两侧行皮下多点注射免疫四次；采集实验兔血液，分离血清进行抗体检测；当抗体滴度达到1∶32时，对实验兔进行颈动脉采血；静置待血清析出后进行离心操作即可获得兔抗大沙鼠免疫血清。本发明工艺步骤简单，使用方便。

主权项

1.一种兔抗大沙鼠免疫血清，其特征在于它是由下列两个工艺步骤制得的：a、大沙鼠血清IgG抗原的制备：(1)采集大沙鼠血液，静置待血清析出后以至少2000转/分钟的离心速度用离心机分离获取大沙鼠血清；(2)再以至少5000转/分钟的离心速度用离心机去除步骤(1)大沙鼠血清中的颗粒状物；(3)将上述离心后的血清与等量生理盐水混合，逐滴加入饱合硫酸铵溶液至20％浓度，滴加时边加边摇，然后将其放置于4℃的冰箱内保持至少20分钟，再以至少8000转/分钟的离心速度进行离心操作5-15分钟，去除血清中的杂物及纤维蛋白；(4)取上清液再补加饱合硫酸铵至35％浓度，然后将其放置于4℃的冰箱内保持至少20分钟，再以至少8000转/分钟的离心速度进行离心操作5-15分钟，弃上清液留取沉淀物，即为大沙鼠血清中的粗提IgG；(5)将所述沉淀物重新用生理盐水溶解，重复(3)和(4)步骤进行进一步纯化；(6)将纯化后的大沙鼠IgG用生理盐水溶解后，装入透析袋用0.01M pH7.2 PBS进行透析过夜，透析后获得的大沙鼠IgG抗原置于-20℃的冰箱内备用；b、兔抗大沙鼠IgG抗体的制备：(1)选取两只各2.5公斤左右的健康新西兰实验兔备用；(2)用1ml注射器吸取由a步骤制得的大沙鼠IgG抗原1ml，沿兔背脊柱两侧行皮下多点注射进行初次免疫；(3)间隔半个月后进行第二次免疫，免疫量及方法同上；(4)然后再每隔15天免疫一次，剂量及方法同上，共免疫四次；(5)末次免疫15天后，由股静脉采集实验兔血液1mL，分离血清进行抗体检测，检测方法为免疫环状沉淀试验和红细胞凝集试验；(6)当抗体滴度已达到环状沉淀试验要求的1∶32时，则对实验兔进行腹腔加强免疫三天后进行颈动脉采血；(7)采集的血液，静置待血清析出后至少2000转/分钟的离心速度进行离心操作即可获得兔抗大沙鼠免疫血清。