[发明专利]利用胚状体快速繁殖巴西橡胶树自根幼态无性系的方法

摘要

本发明公开了一种利用胚状体快速繁殖巴西橡胶树自根幼态无性系的方法，特征是包括花药胚性愈伤组织诱导过程、初生体细胞胚胎发生过程、次生胚状体的诱导过程和植株再生过程。本发明工艺流程简单，生产成本低，解决了传统方法不断采集花蕾或果实、不断诱导胚性愈伤组织的重复、低效、繁重的体力劳动，可大量、快速、持续、低成本的获得成熟的胚，实现了胚的增殖，从而实现了巴西橡胶树自根幼态无性系的高效扩繁，提高了自根无性系扩繁的效率，可以大大提高巴西橡胶树自根无性系植株工厂化生产的效率。

主权项

1.一种利用胚状体快速繁殖巴西橡胶树自根幼态无性系的方法，其特征在于：包括花药胚性愈伤组织诱导过程、初生体细胞胚胎发生过程、次生胚状体的诱导过程和植株再生过程：1)、所述花药胚性愈伤组织诱导过程是以巴西橡胶树花蕾为外植体，将花蕾用75％酒精表面消毒30～60秒后，再用0.1％氯化汞消毒10～15分钟，最后用无菌水冲洗3～6次，每次3～5分钟；将消毒好的花蕾中的雄蕊剥出，将其接种到诱导愈伤培养基上于25～28℃的温度进行暗培养40～60天；所述诱导愈伤培养基是以MS培养基为基础培养基，并将MS培养基中的磷酸二氢钾、无水氯化钙、四水硫酸锰、七水硫酸镁的含量调整为磷酸二氢钾350～500mg/L、无水氯化钙150～400mg/L、四水硫酸锰10～40mg/L、七水硫酸镁400～600mg/L，并添加2，4-D 0.5～3mg/L、KT 0.5～3mg/L、NAA 0.5～3mg/L、Phytagel2～3g/L、蔗糖50～90g/L、椰子水40～60ml/L；2)、所述初生胚状体诱导过程是将经过诱导培养的愈伤组织接种到胚胎诱导培养基上于25～28℃进行暗培养40～60天，得到胚状体；所述胚胎诱导培养基是以MS培养基为基础培养基，并将MS培养基中的磷酸二氢钾、无水氯化钙、四水硫酸锰、七水硫酸镁的含量调整为磷酸二氢钾350～500mg/L、无水氯化钙150～400mg/L、四水硫酸锰10～40mg/L、七水硫酸镁400～600mg/L，并添加2，4-D 0.5～3mg/L、KT 0.5～3mg/L、NAA 0.5～3mg/L、Phytagel 2～3g/L、蔗糖50～90g/L；3)、所述次生胚状体的诱导过程是将得到的胚状体切成0.2-0.5cm的切块，并接种到诱导愈伤培养基上于25～28℃的温度进行暗培养40～60天；然后再接种到胚胎诱导培养基上于25～28℃的温度进行暗培养40～60天，得到成熟子叶形胚；4)、所述植株再生过程是将成熟子叶形胚转移到出苗培养基上进行培养，每天16小时光照，温度为25～28℃，培养20天后开始出苗；所述出苗培养基是以MS培养基为基础培养基，并将MS培养基中的磷酸二氢钾、无水氯化钙、四水硫酸锰、七水硫酸镁的含量调整为磷酸二氢钾350～500mg/L、无水氯化钙150～400mg/L、四水硫酸锰10～40mg/L、七水硫酸镁400～600mg/L，并添加KT 0.1～1.0mg/L、GA30.5～3mg/L、IAA 0.5～4mg/L、Phytagel 2～4g/L、蔗糖30～70g/L、活性碳0.5～3g/L、椰子水40-60ml/L。