[发明专利]多环芳烃厌氧降解混合菌群的富集与驯化筛选方法及应用

摘要

本发明公开了属于受污染土壤与水的生物降解处理技术领域的一种多环芳烃厌氧降解菌群的富集与驯化筛选方法及应用。在污染的土壤中按质量比加入电子受体、硫化钠和多环芳烃混合物，密封静置6个月后在充满氮气的厌氧箱内按比例加入基础培养基、微量金属液和维生素c溶液的混合液，进行土壤驯化，在充满氮气的厌氧箱内向厌氧瓶内加入多环芳烃、基础培养基、微量金属液、维生素c溶液及吸附剂，按水与土的质量比向厌氧瓶内接入富集驯化的土壤，并且按质量比加入电子受体与硫化钠。在温度为20±2℃的旋转振荡器中培养20～25天后进行循环转接，循环5次以上即可得到厌氧降解多环芳烃的微生物菌群。本方法能够富集与驯化筛选到厌氧降解性能好的微生物菌群，对多环芳烃的降解速率范围为0.01～1.04mg·L^-1·d^-1。

主权项

1. 一种多环芳烃厌氧降解菌群的富集与驯化筛选技术，其特征在于，该技术的具体步骤如下：(1)选用受石油污染的土壤，按土与水的质量比为1～1.2:1的比例加入去离子水，按土与硫化钠的质量比为200～300:1的比例加入硫化钠，按土与多环芳烃的质量比为5000～6000:1的比例加入多环芳烃晶体混合物，按土与电子受体的质量比为150～200:1的比例加入电子受体，混合均匀后密封静置时间大于6个月。(2)向体积为100～200mL的厌氧瓶中加入7.5～8.0mL浓度为1g/L的萘、菲、芴和芘的丙酮溶液，其中萘、菲、芴和芘的比例为150:10:1:1，为除去丙酮将厌氧瓶开口放置2天。(3)按水与高分子树脂吸附剂的质量比为5:1的比例用去离子水将吸附剂清洗5次，然后按乙醇与吸附剂的质量比为3:1的比例用99％的乙醇将吸附剂清洗3次，为彻底除去吸附剂中的乙醇将清洗后的吸附剂在温度为60℃的烘箱中放置2天。(4)在充满氮气的厌氧箱内向步骤(2)中的厌氧瓶中入50～60mL基础培养基、0.5mL微量金属液和0.1mL维生素c溶液，为指示厌氧瓶内的厌氧状态加入0.1mL刃天青溶液；其中基础培养基的组成为：NH4Cl：1.2g·L-1，KH2PO4：1.2g·L-1，MgCl2：0.15g·L-1，CaCl2·2H2O：0.05g·L-1；微量金属液的组成为：CoCl2·6H2O：35mg·L-1，CuCl2：0.20mg·L-1，H3BO3：6.0mg·L-1，MnCl2·4H2O：25mg·L-1，Na2MoO4·2H2O：3.0mg·L-1，NiCl2·2H2O：2.0mg·L-1，ZnCl2：2.5mg·L-1。(5)在充满氮气的厌氧箱内向步骤(4)中的厌氧瓶内按水与吸附剂的质量比为160～170:1的比例加入步骤(3)处理后的吸附剂，按水与电子受体的质量比为200～300:1的比例加入电子受体，按水与硫化钠质量比为1500～2000:1的比例加入硫化钠。将密封后的厌氧瓶放置转速为100r/min的振荡器中5～7天。(6)在充满氮气的厌氧箱内按水土质量比为200～250:1的比例向步骤(5)中的厌氧瓶内接入步骤(1)驯化的土壤。将密封后厌氧瓶在温度为20±2℃、转速为100r/min的振荡器中培养20～25天后。按接种体积比为200～250:1的比例转入另一按步骤(2)至(5)处理后的厌氧瓶内，当转接次数大于5之后即可获得去除多环芳烃的厌氧降解菌群。