[发明专利]鹿茸胶原的分离纯化制备方法

摘要

本发明涉及一种分离提取鹿茸胶原的方法，具体步骤是将鹿茸用Tris－HCl缓冲液匀浆液浸提后，离心，沉淀用Tris－HCl缓冲液洗净，加HOAc－NaOAc缓冲液，搅拌，浸提，离心，沉淀用Tris－HCl缓冲液洗净，加70％乙醇4℃浸提48h，60℃回流提取48h后，旋转蒸发回收乙醇，提取液置于截流分子量范围8～15kDa的透析袋中，对蒸馏水透析24h，－20℃预冻24h，冻干，即得含量约为70％的鹿茸胶原。本发明的鹿茸胶原的提取工艺较已有的胶原提取方法，简便，易行，活性实验表明，鹿茸胶原具有促进细胞生长的作用，仍然保持有生物活性。证明我们的提取方法没有破坏胶原的天然构象。

主权项

1.鹿茸胶原的分离纯化制备方法，其步骤如下：①去除水溶性蛋白：高速组织捣碎机匀浆鹿茸，加匀浆液体积1.5～2倍的含1～3mM β-巯基乙醇和1～3mM EDTA的15～25mM pH7.5～8.3的Tris-HCl缓冲液或pH7.5～8.3的NaH2PO4-Na2HPO4缓冲液，搅拌、浸提、离心得上清液和沉淀，沉淀再加其体积1～1.5倍的上述缓冲液，搅拌，浸提、离心得去除水溶性蛋白的除杂沉淀；②胶原的提取：取上述步骤获得的除杂沉淀洗净，再加沉淀体积1～1.5倍的含1～3mM β-巯基乙醇和1～3mM EDTA的20～30mM pH3.1～3.5HOAc-NaOAc缓冲液，搅拌，1～4℃浸提48～72h，4000～5000rpm离心30～50min，弃上清；沉淀洗净后加沉淀体积1.5～2倍体积的65％～70％乙醇0～4℃浸提36～48h，60～65℃回流提取48～72h；③回收乙醇：50～55℃、60～65rpm旋转蒸发回收乙醇，提取液经透析、预冻、冻干后即得鹿茸胶原。