[发明专利]一种食品中丽春红2R的检测方法

摘要

本发明公开了一种食品中丽春红2R的检测方法，非水溶性待测样品在超声波发生器中经乙醇－氨溶液提取上清液，水溶性样品用热水溶解后提取上清液，然后用弱阴离子固相萃取小柱萃取，用高效液相色谱仪分析萃取液，根据色谱峰的保留时间来确定是否含有丽春红2R；进一步采用加标回收法，根据线性方程计算得到实际样品中的浓度，再根据检测量来确定丽春红2R的含量，其检出限为0.02μg/ml，相对标准偏差为0.33－2.86％，加标回收率为90.05－94.91％，本发明能显著减少溶剂用量并简化样品处理程序，有效除去内源干扰物质，其不受检测者的主观影响，步骤简单，灵敏度高，检测准确。

主权项

1.一种食品中丽春红2R的检测方法，其特征是：它包括以下步骤：(1)确定检测的标准A、定性检测标准：取丽春红2R标准品用超纯水溶解后定容于容量瓶中，配制成浓度为0.5-2.0mg/mL的标准储备液，将丽春红2R标准储备液用超纯水稀释配制成浓度范围为0.1-15μg/mL的标准溶液，用孔径≤0.45μm的滤膜过滤后，在XDB-C18色谱柱；流动相A：0.005mol/L乙酸铵NH4Ac+0.06％三乙胺水溶液，用0.1mol/L的冰乙酸溶液调整pH为8，B：色谱纯乙腈CH3CN；洗脱梯度：t＝0分钟，10％B；t＝2分钟，10％B；t＝15分钟，90％B；t＝17分钟，10％B；流速1.0mL/分钟，检测波长504nm，柱温箱温度27℃，进样量10μL的分析条件下，由手动进样器进高效液相色谱仪分析，根据丽春红2R标准样品的色谱峰的保留时间作为定性标准；B、定量检测标准：将步骤A中制取的丽春红2R标准储备液用超纯水分别稀释配制成浓度范围为0.1-0.5μg/mL、0.5-1.0μg/mL、1.0-2.5μg/mL、2.5-5.0μg/mL、5.0-10μg/mL、10-15μg/mL的标准溶液，分别用孔径≤0.45μm的滤膜过滤后，在步骤A的色谱分析条件下，由手动进样器分别进高效液相色谱仪分析，将所得色谱峰的浓度和对应的峰面积绘制成标准工作曲线；在丽春红2R浓度为0.1-15μg/mL范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系，线性回归方程为：y＝0.0419x+0.0191，线性相关系数为1，以此为实际样品的测定提供定量标准；(2)对待测的食品进行检测：A、对待测的食品进行前处理：取检测量的非水溶性待测样品加入到具塞试管中，加入乙醇∶水∶氨水＝75∶24∶1的乙醇--氨溶液，将试管置于温度为50±2℃的超声波发生器中超声提取20-30分钟，提取的上清液收集到容量瓶中，残渣再加入上述的乙醇-氨溶液，再在超声波发生器中提取上清液3次，将提取的上清液混匀后，再加优级纯冰醋酸溶液，使其pH值调节为6±0.5，加超纯水稀释，定容于容量瓶内，取稀释液离心，吸取上清液备用；或者称取检测量水溶性样品放入烧杯中用热超纯水搅拌溶解，加超纯水稀释，定容于容量瓶内，取稀释液离心，吸取上清液备用；将弱阴离子固相萃取小柱先用色谱纯甲醇活化、再用超纯水进行活化，活化时液面不能干涸，然后取备用上清液用移液器上样2-3ml后，再分别先后用超纯水和色谱纯甲醇3-4ml洗涤固相萃取小柱，输入空气，干燥固相萃取小柱后，最后用含2％的优级纯氨水的色谱纯甲醇溶液洗脱，并收集洗脱液；将洗脱溶液在用氮吹仪吹除优级纯氨水和色谱纯甲醇溶液溶剂；B、定性检测：将步骤A中吹除溶剂后的洗脱溶液置于具塞试管中，再加入超纯水，超声波发生器中超声溶解，溶液经孔径≤0.45μm滤膜过滤后，在XDB-C18色谱柱；流动相A：0.005mol/L乙酸铵NH4 Ac+0.06％三乙胺水溶液，用0.1mol/L的冰乙酸调整pH为8，B：色谱纯乙腈CH3CN；洗脱梯度：t＝0分钟，10％B；t＝2分钟，10％B；t＝15分钟，90％B；t＝17分钟，10％B；流速1.0mL/分钟，检测波长504nm，柱温箱温度27℃，进样量10μL的色谱分析条件下，由手动进样器进高效液相色谱仪分析，根据色谱峰的保留时间来确定是否含有丽春红2R。