[发明专利]一种基因免疫制备人类Ⅰ型胸苷激酶单克隆抗体的新方法无效
| 申请号： | 200710203299.0 | 申请日： | 2007-12-21 |
| 公开（公告）号： | CN101186922A | 公开（公告）日： | 2008-05-28 |
| 发明（设计）人： | 丁克祥;郑永晨;刘卫国;费定宇;丁宇 | 申请（专利权）人： | 丁克祥 |
| 主分类号： | C12N15/54 | 分类号： | C12N15/54;C12N15/79;C12N5/18;C07K16/40;G01N33/577 |
| 代理公司： | 岳阳市科明专利事务所 | 代理人： | 彭乃恩 |
| 地址： | 510515广东省广州市白云区同和广州*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种基因免疫制备人类Ⅰ型胸苷激酶单克隆抗体的新方法。其具体方法是：首先，从经过氨基喋呤处理的Hela细胞中提取RNA，经逆转录PCR扩增出TK1 cDNA，TA克隆后进行DNA序列分析，确定正确的TK1基因序列，然后亚克隆入pSecTag2/Hygro B载体的HindIII和XhoI位点之间(pSecTag/TK1)，插入片段表达的蛋白质可以从真核细胞中分泌到胞外。直接用pSecTag/TK1重组质粒DNA免疫小鼠，用骨髓瘤细胞和脾细胞融合制备杂交瘤，筛选出产抗TK1的单克隆抗体的杂交瘤；通过小鼠腹水大量制备TK1的单克隆抗体。最后，将收集的小鼠腹水高速冷冻离心，其上清液用正辛酸一硫酸胺法分别进行提取，并用蛋白G柱亲和层析法纯化，即可得到可用于检测临床样品中TK1标志物的TK1单克隆抗体。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基因 免疫 制备 人类 型胸苷 激酶 单克隆抗体 新方法 | ||
【主权项】：
1.一种基因免疫制备人类I型胸苷激酶单克隆抗体的新方法，其特征在于：将氨基喋呤处理的Hela细胞RNA作为原始模板，其中RNA经逆转录PCR获得TK1 cDNA，其中TK1基因序列是用TK1 TA克隆双向测序获得。
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