[发明专利]基于AFLP和高通量测序的对分子标记的高通量检测

摘要

本发明涉及一种鉴别和检测分子标记的高通量方法，其中限制性片段被生成，合适的包含(样品特异性)鉴别子的接头被连接。与接头相连的限制性片段可通过在3’端携带选择性核苷酸的、接头兼容性引物进行选择性扩增。经扩增的与接头相连的限制性片段经高通量测序方法(至少部分)测序，限制性片段的序列部分和样品特异性鉴别子作为分子标记。该高通量方法将AFLP(扩增片段长度多态性)方法和高通量测序技术结合起来。

主权项

1. 一种鉴定样品中限制性片段的方法，包括的步骤为：(h)提供核酸样品；(i)以至少一种限制性内切酶消化该样品以获得一套限制性片段；(j)提供双链的合成接头，其包括-5’端引物兼容序列，-样品特异性鉴别子部分，-与限制性内切酶的识别序列的剩余部分互补的部分；(k)将该双链的合成接头连接至该套限制性片段，以提供一套与接头相连的限制性片段；(1)以一个或多个引物扩增此套与接头相连的限制性片段，引物至与以下互补：——样品特异性鉴别子部分，——与限制性内切酶的识别序列的剩余部分互补的部分，以提供扩增的、与接头相连的限制性片段(扩增子amplicons)；(m)测定至少该样品特异性鉴别子部分的序列，限制性内切酶的识别序列的剩余部分的序列，与其临近的限制性片段部分序列，以及扩增的、与接头相连的限制性片段的(部分)序列；(n)鉴定样品中扩增的、与接头相连的限制性片段是否存在。