[发明专利]从细胞培养物分离纯化的水泡性口炎病毒的纯化方法有效
| 申请号： | 200780014090.8 | 申请日： | 2007-04-19 |
| 公开（公告）号： | CN101426905A | 公开（公告）日： | 2009-05-06 |
| 发明（设计）人： | 康云;马克·威廉·卡特勒;阿马杜·阿弗雷伊·瓦塔拉;克里斯滕·埃利萨·塞弗森 | 申请（专利权）人： | 惠氏公司 |
| 主分类号： | C12N7/02 | 分类号： | C12N7/02 |
| 代理公司： | 北京律盟知识产权代理有限责任公司 | 代理人： | 刘国伟 |
| 地址： | 美国新*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | 本发明描述从哺乳动物细胞培养物获得具有改良纯度的水泡性口炎病毒(vesicular stomatitis virus，VSV)的新颖纯化方法。更特定来说，在某些实施例中，描述一种从感染VSV的哺乳动物细胞培养的细胞培养液纯化VSV的方法，所述方法包含：通过低速离心使所述细胞培养液澄清和回收上清液中的所述VSV；通过0.2μm到0.45μm过滤器过滤所述上清液和回收过滤溶液中的VSV；将VSV过滤的溶液装载到用第一pH值缓冲盐溶液平衡的阴离子交换膜吸附剂上，用第二pH值缓冲盐溶液从所述阴离子交换膜吸附剂洗脱VSV和回收洗脱VSV的洗脱份；通过切向流动过滤(tangential flow filtration，TFF)使用具有介于300kDa与1,000kDa之间的截留分子量的TFF膜纯化回收的VSV和回收保留物中的VSV，并且通过0.2μm到0.22μm过滤器过滤VSV保留物和回收过滤溶液中的VSV。 | ||
| 搜索关键词： | 细胞培养 分离 纯化 水泡 口炎 病毒 方法 | ||
【主权项】：
1. 一种从感染水泡性口炎病毒(vesicular stomatitis virus，VSV)的哺乳动物细胞培养的细胞培养液纯化VSV的方法，所述方法包含：(a)通过低速离心使所述细胞培养液澄清和回收上清液中的VSV；(b)通过0. 2μm到0.45μm过滤器过滤步骤(a)的所述上清液和回收过滤溶液中的VSV；(b)将步骤(b)的所述VSV过滤溶液装载到用第一pH值缓冲盐溶液平衡的阴离子交换膜吸附剂上，用第二pH值缓冲盐溶液从所述阴离子交换膜吸附剂洗脱VSV，和回收洗脱VSV的洗脱份；(d)通过切向流动过滤(tangential flow filtration，TFF)使用具有介于300kDa与1,000kDa之间的截留分子量的膜来纯化步骤(c)中所回收的VSV和回收保留物(retentate)中的所述VSV，和(e)通过0. 2μm到0.22μm过滤器过滤来自步骤(d)的VSV保留物和回收过滤溶液中的VSV。
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