[发明专利]Boc和Fmoc固相肽合成

摘要

本发明公开了一种利用Boc和Fmoc保护的氨基酸两者及氯甲基化的聚苯乙烯树脂合成包含三个或更多个氨基酸残基的肽的固相方法。

主权项

1.一种用于制备包含三个或更多个氨基酸残基的肽的方法，该肽具有N-端氨基酸、邻近该N-端氨基酸的倒数第二个氨基酸和C-端氨基酸，其中所述方法包括如下步骤：(a)通过酯键把第一氨基酸连到固体载体树脂上，以形成第一级偶联产物，其包括(i)使碳酸铯的水溶液与第一氨基酸的醇溶液反应，以形成第一氨基酸的铯盐，(ii)获得第一氨基酸的无溶剂铯盐，(iii)在干的极性非质子溶剂中使固体载体树脂与第一氨基酸的铯盐反应，以形成第一级偶联产物；其中第一氨基酸与肽的C-端氨基酸对应，第一氨基酸的非侧链氨基被Boc封闭并且第一氨基酸没有需要保护的侧链官能团，以及固体载体树脂为氯甲基化的聚苯乙烯树脂；(b)利用酸从第一级偶联产物中解封闭Boc，以形成第一级解封闭的偶联产物；(c)任选地把下一个氨基酸偶联到第一级解封闭的偶联产物上，其包括在包含肽偶联试剂的有机溶剂中使下一个氨基酸与第一级解封闭的偶联产物反应，以形成下一级封闭的偶联产物，其中下一个氨基酸具有被Boc封闭的非侧链氨基，并且如果下一个氨基酸具有一个或更多个侧链官能团，那么侧链官能团不需要保护，或者侧链官能团具有对于分别用来解封闭Boc和Fmoc的酸试剂和碱试剂稳定的保护基团；(d)从下一级封闭的偶联产物中解封闭Boc，其包括使下一级封闭的偶联产物与酸反应，以得到下一级解封闭的偶联产物；(e)任选地重复步骤(c)和(d)，每个循环形成(X+1)级的下一级解封闭的偶联产物，其中X为所需的循环重复次数；(f)把下一个氨基酸偶联到得自(b)的第一级解封闭的偶联产物上，或者任选地偶联到得自(e)的(X+1)级的下一级解封闭的偶联产物上，其包括在包含肽偶联试剂的有机溶剂中使下一个氨基酸与所述第一级解封闭的偶联产物或所述(X+1)级的下一级解封闭的偶联产物反应，以形成下一级封闭的偶联产物，其中下一个氨基酸具有被Fmoc封闭的非侧链氨基，条件是如果下一个氨基酸具有一个或更多个侧链官能团，那么侧链官能团不需要保护，或者侧链官能团具有对于用来解封闭Fmoc的碱试剂稳定的保护基团；(g)从下一级封闭的偶联产物中解封闭Fmoc，其包括使下一级封闭的偶联产物与伯胺或仲胺反应，以得到下一级解封闭的偶联产物；(h)任选地重复步骤(f)和(g)，每个循环形成(X+1)级的下一级解封闭的偶联产物，其中X为所需的循环重复次数，直到肽的倒数第二个氨基酸被偶联和解封闭；(i)把N-端氨基酸偶联到(X+1)级的下一级解封闭的偶联产物上，其包括在包含肽偶联试剂的有机溶剂中使N-端氨基酸与(X+1)级的下一级解封闭的偶联产物反应，以形成完成的封闭的偶联产物，其中N-端氨基酸具有被Boc或Fmoc封闭的非侧链氨基；(j)从完成的封闭的偶联产物中解封闭Boc或Fmoc基团，其包括在Boc的情况下使完成的封闭的偶联产物与酸反应，或者在Fmoc的情况下与碱反应，以形成完成的肽-树脂产物；(k)如果侧链官能团存在于完成的肽-树脂产物上，那么任选地脱保护完成的肽-树脂产物的侧链官能团，其包括使完成的肽-树脂产物与适当的脱保护试剂反应，以形成脱保护的完成的肽-树脂产物；及(l)使肽与完成的肽-树脂产物或脱保护的完成的肽-树脂产物的固体载体树脂断裂，以得到肽，其包括使完成的肽-树脂产物或脱保护的完成的肽-树脂产物与氨、伯胺或仲胺反应，直到肽与树脂的断裂基本上完成，条件是在肽的合成中，步骤(f)和(g)必须进行至少一次。