[发明专利]环状甲基化DNA中的定点诱变

摘要

本发明涉及甲基化的环状DNA分子的定点诱变的新方法，其中通过利用诱变引物对和甲基化酶缺陷大肠杆菌使甲基化的环状DNA分子产生定点诱变。本方法选用的诱变引物对是5′端或3′端部分或完全互补的诱变引物对。首先，诱变引物与其相对应的甲基化环状双链DNA分子(母链)的互补链退火；然后，利用DNA聚合酶和非甲基化的dNTP进行聚合酶链反应产生突变的非甲基化子链DNA分子；最后，把含甲基化母链DNA分子和突变的非甲基化子链DNA分子的聚合酶链反应混合产物转化进入甲基化酶缺陷的大肠杆菌。甲基化的母链DNA分子的复制在甲基化酶缺陷宿主细胞中受到抑制。相反，非甲基化子链DNA分子(含有突变)在甲基化酶缺陷宿主细胞中高效率复制，从而得到有效的富集和回收。另外，本发明还提供了根据本发明的方法引入定点诱变的试剂盒。

主权项

1.一种向所选环状甲基化核酸中引入定点突变的方法，包括：(a)利用DNA聚合酶、互补的诱变引物、非甲基化dNTP和所选待诱变的环状甲基化核酸进行聚合酶链反应(PCR)；(b)把步骤(a)中所获得的PCR产物的混合物转化入甲基化酶缺陷大肠杆菌，其中经诱变的非甲基化核酸在甲基化酶缺陷大肠杆菌中有效复制；(c)从所述大肠杆菌回收经诱变的非甲基化核酸。