[发明专利]一种检测土壤酸性磷酸单酯酶活性的分析方法

摘要

本发明涉及一种检测土壤中酸性磷酸单酯酶活性的分析方法：1)称取鲜土样品二组2n(n≥3)份置于三角瓶中，向三角瓶中加入甲苯和缓冲溶液，向第一组三角瓶中加入1ml底物对硝基苯磷酸二钠溶液，第二组作为样本对照，摇匀，盖好瓶塞后恒温培养；2)培养结束后，向第一组和第二组加碱性三羟基氨基甲烷溶液和氯化钙溶液终止反应并显色，并向第二组加入底物溶液，混匀，过滤；3)用分光光度计在410nm处比色测定吸光度值A；4)根据标准曲线计算对硝基苯酚含量，进而计算磷酸单酯酶活性。本发明优点为：1)简化了操作步骤，减少了实验过程中的不确定性；2)减少对设备要求的依赖性；3)方法准确度高，易操作；4)结果稳定可靠，重现性好。

主权项

1.一种检测土壤中酸性磷酸单酯酶活性的分析方法，其特征在于：1)分别称取1-2g鲜土样品2n份分别置入2n个三角瓶中，n≥3，分成二组，每组n个，向二组2n个三角瓶中加入0.2-0.4ml分析纯甲苯和4-8ml pH6.45-6.55缓冲溶液试剂，向第一组n个三角瓶中加入1-2mL 25-50m moL·L-1的底物对硝基苯磷酸二钠工作液，以第二组n个三角瓶中作为样本对照，混匀，盖好瓶塞，放在36.5-37.5℃恒温培养中恒温培养1-2h；2)培养结束后，向所有三角瓶中加入4-8mL 0.95-0.15moL·L-1pH＝11.5-12.5的碱性三羟基氨基甲烷溶液和1-2mL 0.25-0.5moL·L-1氯化钙溶液，向样本对照组n个三角瓶中添加1-2mL 25-50m moL·L-1的底物对硝基苯磷酸二钠工作液，混匀，过滤；3)用分光光度法于410nm处分别测定上述所得三角瓶中溶液的吸光度A；以对硝基苯酚溶液标准溶液，以对硝基苯酚溶液的系列浓度和其分别用分光光度法在410nm测定的吸光值A’制作工作标准曲线，得到斜率b；根据吸光值A和斜率b，计算所测定滤液中对硝基苯酚的浓度S，S＝A*b；计算样品中对硝基苯酚含量m1；4)计算磷酸单酯酶酶活性：计算公式为：w＝m1/(m2×K)＝Sμg C6H5NO3·g-1干土·h-1式中：w：单位土壤单位时间内对硝基苯酚的产生量；m1：测试溶液中对硝基苯酚的质量，样品测定吸光值折换的产物质量值；m2：鲜土样品质量；k：水分系数，单位重量的烘干土重/鲜土重。