[发明专利]一种利用枯草芽孢杆菌发酵羽毛生产L－苯丙氨酸的方法

摘要

本发明公开了一种利用枯草芽孢杆菌发酵羽毛生产L－苯丙氨酸的方法，是将废弃羽毛，氯化钠，氯化镁，氯化钙，磷酸二氢钾，磷酸氢二钾、酵母粉按照比例混合，加净化水溶解，热处理灭菌；然后接入枯草芽孢杆菌YYW－1 CGMCC NO.2396，35～40℃发酵48～72小时，发酵产物酸调后经732铵型阳离子交换树脂吸附和洗脱而获得L－苯丙氨酸浓溶液。本发明方法原料成本低廉，实现了废弃物高值化利用，而且生产的L－苯丙氨酸光学纯度高，质量好，能够满足工业和医药行业的需要。

主权项

1.一种利用枯草芽孢杆菌发酵羽毛生产L-苯丙氨酸的方法，步骤顺序如下：(1)菌种选择：选用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)YYW-1 CGMCC NO.2396；(2)种子培养：将步骤(1)所述菌株，在无菌条件下用接种环接1～2环于30～40mL液体羽毛发酵种子培养基中，35～40℃震荡培养24～36小时，得种子液；(3)发酵培养：摇瓶发酵：以3～7％的体积比的接种量，将种子液接种于装有瓶体积40％～60％羽毛发酵培养基的摇瓶中，35～40℃，以150～180转/分钟的转速摇瓶发酵48-60小时，发酵结束；发酵罐发酵：以3～10％的体积比的接种量，将种子液接种于装有罐体积65％～70％羽毛发酵培养基的发酵罐中，35～40℃进行通风搅拌培养，其中搅拌转速为180～220r/min，通气量以发酵液体积m3/空气体积m3·分钟计为1∶1.1～1.2，罐内压力0.1±0.02MPa，发酵48～72小时，发酵结束；(4)发酵产物分离提纯：待步骤(3)所述发酵结束后，向发酵液中加入盐酸，调节pH值至1.2±0.1，然后加入732铵型树脂，吸附24～30小时；用纯水将吸附后的树脂洗至无铵离子，再将树脂放入阳离子交换柱中，用氨水解析，即得纯度为95％以上的L-苯丙氨酸浓溶液；上述羽毛发酵种子培养基及制备方法为：按重量份氯化钠0.01-0.2份、氯化镁0.005-0.2份、氯化钙0.001-0.2份、磷酸二氢钾0.01-0.2份、磷酸氢二钾0.02-0.5份、硫酸锰0.01-0.5份、酵母粉0.01-0.5份、废弃羽毛0.1-5.0份混合，加纯净水1-94份溶解，调节pH值至6-8，蒸汽灭菌后备用；上述羽毛发酵培养基及制备方法为：按重量份氯化钠0.01-0.2份、氯化镁0.005-0.2份、氯化钙0.001-0.2份、磷酸二氢钾0.01-0.2份、磷酸氢二钾0.01-0.5份、酵母粉0.01-0.3份、废弃羽毛0.5-5.0份混合，加纯净水1-94份溶解，调节pH值至6-8，蒸汽灭菌后备用。