[发明专利]伤寒沙门氏菌快速检测试剂盒的制备和检测方法无效
| 申请号： | 200810015002.2 | 申请日： | 2008-03-25 |
| 公开（公告）号： | CN101255460A | 公开（公告）日： | 2008-09-03 |
| 发明（设计）人： | 梁成珠;高宏伟;贾俊涛;林超 | 申请（专利权）人： | 山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心 |
| 主分类号： | C12Q1/10 | 分类号： | C12Q1/10;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 青岛海昊知识产权事务所有限公司 | 代理人： | 张中南 |
| 地址： | 266002*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种利用环介导等温扩增(LAMP)技术进行菌样的快速检测的方法，具体说是一种伤寒沙门氏菌快速检测试剂盒的制备和检测方法。该试剂盒内包括环介导等温扩增反应液、Bst DNA聚合酶、显色剂；环介导等温扩增反应液中含有反应缓冲液、dNTP、硫酸镁、上游内引物5－TTACGTCACCAACGAC ACGGGACGTATTGGGCAATGACTGG－3、下游内引物5－CGGTAAATACCATCCCCACGGCT AACGCAGCGAGAATGGC－3、上游外引物5－GTCGCGTACTTTACGCCAT－3、下游外引物5－ACCCTGACCATCCACCAG－3和甜菜碱；检测伤寒沙门氏菌的方法包括细菌DNA的提取、伤寒沙门氏菌的环介导等温扩增、显色检测。其优点是快速、特异性强、灵敏度高而且成本低。 | ||
| 搜索关键词： | 伤寒 沙门氏菌 快速 检测 试剂盒 制备 方法 | ||
【主权项】：
1.一种伤寒沙门氏菌快速检测试剂盒，其特征在于其中的试剂包括(1)-(4)：(1)环介导等温扩增反应液：包括10×Thermopol反应缓冲液、300-500μmol/L dNTP、2-4mmol/L硫酸镁、0.8-1.2μmol上游内引物、0.8-1.2μmol/L下游内引物、0.2-0.3μmol/L上游外引物、0.2-0.3μmol/L下游外引物和1-1.5mol/L甜菜碱；其中10×Thermopol反应缓冲液含有200mmol/L pH8.8的三羟基甲基氨基甲烷-盐酸、100mmol/L氯化钾、100mmol/L硫酸铵、20mmol/L硫酸镁和1％曲拉通X-100；其中上游内引物；5-TTACGTCACCAACGACACGGG-ACGTATTGGGCAATGACTGG-3、下游内引物；5-CGGTAAATACCATCCCCACGGC-TAACGCAGCGAGAATGGC-3、上游外引物：5-GTCGCGTACTTTACGCCAT-3、下游外引物：5-ACCCTGACCATCCACCAG-3；(2)UNG酶：1U/μL；(3)Bst DNA聚合酶：8U/μL；(4)显色剂：为10％的荧光染料SYBR GREEN I或者DNAGreen。
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