[发明专利]一种遗骸核DNA个体识别的新方法

摘要

本发明公开了一种遗骸(骨、牙)核DNA个体识别的新方法，其原理利用异硫氰酸胍存在的条件下，二氧化硅微粒与核DNA分子特异性的结合，同时用EDTA和PK对遗骸进行脱钙和蛋白消化，最大程度减少DNA分子丢失，达到最大效率分离核酸的目的。该方法和有机溶剂法、盐析法及Chelex－100法相比较，采用等量的骨粉，其DNA提取效率和质量高于以上方法。与此同时，在整个提取过程中，该方法操作步骤简便，易于掌握，无需大型和特殊的仪器设备。提取骨胳、牙齿DNA过程仅需一天的时间就可以完成，骨粉用量为0.25g，能够在1.5ML的管内操作，易于提取过程标准化和省时。该方法重现性好，对同一样本进行盲测检验，结果可以达到高度的一致性。

主权项

1.一种遗骸核DNA个体识别方法，其特征在于，按以下步骤进行：步骤一，样本制备：1)骨：用高压灭菌砂纸抹去骨骼表面0.5mm厚层，254nm紫外线照射1小时防止外源性DNA污染；然后用冷的去离子水、乙醇、乙醚各振摇15分钟，取出干燥，将骨片放入盛有液氮的研钵中，用电钻钻取骨粉备用；2)牙：254nm紫外线照射1小时，然后用冷的去离子水、乙醇、乙醚各振摇15分钟，取出干燥；取牙根牙骨质及牙髓腔内壁的骨粉备用；步骤二，骨、牙齿组织DNA分离和纯化：1)取骨粉或牙粉置于1.5ml的Eppendorf可调液移管中，加1.0ml 0.5M Na2EDTA PH8.0，25ul蛋白酶K，将Eppendorf可调液移管置于旋转混摇器上，室温混摇24小时；2)将样品置于56℃干热器上，室温继续消化2小时；3)离心13000rpm，5分钟；4)取上清液700ul移至另一洁净的试管中，加等体积的6M GuSCN，20ul二氧化硅悬浮液，室温摇匀2小时；5)离心13000rpm，20秒，弃上清液保留硅珠；6)用70％乙醇在-20℃条件下，洗涤硅珠两次，每次离心13000rpm，时间20秒，弃上清液保留硅珠；7)用丙酮在-20℃条件下，洗涤硅珠一次。每次离心13000rpm，时间20秒，弃上清液保留硅珠；8)将样品置于56℃干热器上，10分钟烘干硅珠；9)用65ul灭菌去离子水悬浮硅珠，56℃15分钟洗脱DNA，每5分钟振摇一次；10)离心13000rpm，2分钟，将60ul DNA溶液转移至新管中，-20℃保存备用；步骤三，采用Bio-RAD凝胶成像分析系统对所得的DNA进行定量分析。