[发明专利]一步层析法制备高纯度紫菜藻红蛋白无效
| 申请号： | 200810018867.4 | 申请日： | 2008-01-29 |
| 公开（公告）号： | CN101270148A | 公开（公告）日： | 2008-09-24 |
| 发明（设计）人： | 胡秋辉;杨方美;顾丽;辛志宏;刘承初;周玉林;赵立艳;黎军胜;顾卫明;高军;徐娟;顾俊;余芳;徐春 | 申请（专利权）人： | 南京农业大学 |
| 主分类号： | C07K1/18 | 分类号： | C07K1/18;C07K14/405 |
| 代理公司： | 南京经纬专利商标代理有限公司 | 代理人： | 张素卿 |
| 地址： | 210095江苏省南京*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及一步层析法制备高纯度紫菜藻红蛋白方法，属于海洋生物功能成分制备技术。紫菜经50倍体积的PBS(1mM，pH6.8)缓冲液溶胀，捣碎，再用800瓦超声波进行细胞破碎800秒，得到粗提物，用饱和度45％硫酸铵沉淀，再经0.1um膜微滤、10kDa膜超滤及饱和度20％的硫酸铵反相沉淀，在4℃用饱和度65％的硫酸铵沉淀结晶，一周后，过DEAE cellulose－52阴离子交换层析柱，用不同浓度NaCl的PBS(1mM，pH6.8)缓冲液梯度洗脱，分离纯化得到紫菜藻红蛋白。纯度(A562nm/A280nm)达到5.24，符合试剂级要求。 | ||
| 搜索关键词： | 一步 层析 法制 纯度 紫菜 蛋白 | ||
【主权项】：
1、一步层析法制备高纯度的紫菜藻红蛋白，其特征在于：(1)紫菜经50倍体积的1mM PBS pH6.8缓冲液溶胀，组织捣碎，再用800瓦功率超声波作用800秒进行细胞破碎，得到藻红蛋白的粗提物，用饱和度为45％的硫酸铵沉淀；(2)将沉淀用1mM PBS pH6.8缓冲液溶解，经0.1um微滤膜微滤、10kDa超滤膜超滤后，透析，用饱和度为20％的硫酸铵进行反相沉淀，离心，对上清夜进行透析，用饱和度为65％的硫酸铵沉淀结晶，在4℃条件下存放一周；(3)将晶体用1mM PBS pH6.8缓冲液溶解，透析，过DEAE cellulose-52阴离子交换层析柱，用含离子强度为0.1～0.6MNaCl的1mM PBS pH6.8缓冲液梯度洗脱，分步收集洗脱液，即为获得的紫菜藻红蛋白。
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