[发明专利]一种定量检测动物源食品中头孢类抗生素含量的酶联免疫检测方法

摘要

一种定量检测动物源食品中头孢类抗生素含量的酶联免疫检测方法，属于免疫分析领域。本发明采用具有簇特异性的抗头孢类抗生素的多克隆抗体作为检测试剂，制备酶联免疫检测试剂盒，以头孢氨苄为标准品，通过实验测定不同种头孢类抗生素浓度与头孢氨苄标准品的相对值，给出测定校正因子，有望实现酶联免疫检测试剂盒的多残留检测。本发明具有前处理简单，灵敏度高，精确度高等优点。

主权项

1.一种检测动物源食品中头孢类抗生素的酶联免疫试剂盒，由试剂组和包被板构成，其特征在于：试剂组的组成为：(1)缓冲液：为pH 7.4磷酸盐缓冲液，使用时用蒸馏水按1∶10稀释；(2)显色液A：柠檬酸0.933g，磷酸氢二钠3.68g，18μL双氧水，用蒸馏水定容至100mL；(3)显色液B：60mg 3，3’，5，5’-四甲基对二氨基联苯TMB溶于100mL乙二醇溶液；(4)洗涤液：为含有5％吐温-20的磷酸盐缓冲液，使用时用蒸馏水按1∶10稀释；(5)终止液：为2mol/L的硫酸；(6)冻干封闭液：Tris溶于双蒸水中，盐酸调节pH7.4，加入0.2％的明胶；(7)头孢氨苄标准液：头孢氨苄标准溶液浓度为10mg/mL，使用时用磷酸盐缓冲液稀释至100ng/mL，再稀释至40ng/mL，10ng/mL，2ng/mL，0.1ng/mL，0.01ng/mL五个梯度；(8)酶标记抗抗体：为辣根过氧化物酶标记的羊抗兔抗抗体，使用时按照1∶5000倍稀释；(9)基质掩蔽剂：含0.5％酪蛋白、pH 9.0-9.5、0.01M的磷酸盐缓冲液；包被板的构成为：包被板为96孔或48孔酶标板，采用pH 9.6的碳酸盐缓冲液作为包被缓冲液，用包被缓冲液将头孢氨苄-BSA偶联物稀释至1/6400mg/mL作为包被液，在酶标板的每孔中加入100μL包被液，37℃烘箱放置2h或4℃过夜，用稀释后的洗涤液洗涤三次，每次在吸水纸上拍干，然后加入冻干封闭液37℃烘箱放置2h，取出用稀释后的洗涤液洗涤四次后，冻干，4℃保存。