[发明专利]高效液相色谱荧光法检测水产品中氟苯尼考的残留量

摘要

本测定方法是利用高效液相色谱-荧光法测定水产品中氟苯尼考的残留。水产品样品中氟苯尼考用乙酸乙酯提取，经正己烷去脂、浓缩后，C₁₈固相萃取柱净化，用液相色谱仪-荧光检测器检测、外标法定量。该方法能够快速、灵敏、准确的测定水产品中氟苯尼考残留量。

主权项

一种采用高效液相色谱荧光法检测水产品中氟苯尼考(Florfenicol)残留量的检测技术，其特征在于包括下列步骤：1、乙酸乙酯提取：称取5g样品(精确至0.01g)置于50mL离心管中，加入20mL乙酸乙酯，5g酸性氧化铝，涡旋振荡5min，以10000r/min离心10min，再加入20mL乙酸乙酯，重复提取一次。氟苯尼考微溶于水，易溶于乙酸乙酯、甲醇、乙腈、丙酮等有机溶剂。甲醇、乙腈这两种溶剂对人体毒性较大，同时旋转蒸发时间较长；丙酮具有挥发性，提取效果不好。而乙酸乙酯提取率高、毒性小，容易蒸干。因此，本实验中采用乙酸乙酯作为提取剂。2、正己烷去脂：将旋转蒸发瓶中提取液在40℃旋转至近干，残渣用磷酸缓冲液10mL溶解，转移到50mL离心管中，加入10mL正己烷离心分层，弃正己烷，再加入10mL正己烷，重复一次。氟苯尼考含有-OH、-F、-SO2CH3极性基团，采用非极性的正己烷初步去脂肪，为下一步的C18固相萃取柱净化做好准备，效果较好。3、C18固相萃取柱净化：过C18固相萃取柱前，C18固相萃取柱先后用3mL乙腈和3mL水预洗并活化，弃掉洗涤液。离心管中的下层溶液过C18固相萃取柱，待样液流干后，用3mL水淋洗，弃掉流出液。用6mL乙腈洗脱，将洗脱液收集至150mL旋转蒸发瓶中。于40℃减压旋转蒸发至干。C18固相萃取柱作为非极性吸附剂，以硅胶作为基质，具有键和密度高、流失少、回收率高等特点，能很好地吸附氟苯尼考，去除杂质干扰。4、测定条件：流动相：乙腈∶水＝25∶75；流速：1.0mL/min；柱温：35℃；进样量：10μL；荧光检测器检测：激发波长225nm，发射波长295nm。在此检测条件下，目标峰与杂质峰分开，目标峰的英光强度高，峰形尖锐，对称性好(图1、表1)。